מולטיפּלעקס איין סטעפּ RT-qPCR Premix-UNG
קאַט נומ: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) איז אַ מולטיפּלעקס קוואַנטיטאַטיווע פּקר קיט באזירט אויף רנאַ ווי מוסטער.אין דעם פּראָצעס פון דער עקספּערימענט, פאַרקערט טראַנסקריפּציע און קוואַנטיטאַטיווע פּקר זענען דורכגעקאָכט אין דער זעלביקער רער, וואָס סימפּלאַפייד די יקספּערמענאַל אָפּעראַציע און רידוסט די ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן.אין דעם קיט, דער ערשטער שנירל קדנאַ איז געווען יפישאַנטלי סינטאַסייזד דורך היץ-קעגנשטעליק פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע און קוואַנטיטאַטיווע אַמפּלאַפייד דורך HotStart Tag DNA Polymerase.דער קיט כּולל דער הויפּט אָפּטימיזעד מפּ באַפער, ענזימעס מישן, אאז"ו ו די באַפער לייזונג שוין כּולל מג2+און דנטפּ.אין אַדישאַן, די סיבות וואָס קענען יפעקטיוולי ינכיבאַט די ניט-ספּעציפיש פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן און פֿאַרבעסערן די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט פון קייפל qPCR ריאַקשאַנז זענען צוגעגעבן, וואָס קענען ינשור די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און דורכפירן אַרויף צו קייפל אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף.די דוטפּ / ודג סיסטעם איז צוגעגעבן צו יפעקטיוולי פאַרמייַדן די ריזיקירן פון אַעראָסאָל קאַנטאַמאַניישאַן.
קאַמפּאָונאַנץ
1. באַפער
2. ענזיים מיקס
ספּעציפיקאַציע
| הייס אָנהייב | געבויט-אין הייס אָנהייב |
| דעטעקשאַן אופֿן | אָנפאַנגער-זאָנד דיטעקשאַן |
| פּקר אופֿן | איין שריט RT-qPCR |
| פּאָלימעראַסע | טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע |
| טיפּ פון מוסטער | דנאַ |
סטאָרידזש טנאָים
דער פּראָדוקט איז שיפּט מיט טרוקן ייַז און קענען זיין סטאָרד אין -25 ~ -15 ℃ פֿאַר 1 יאָר.עס זאָל ויסמייַדן אָפטפרירן-טאָ.עס איז רעקאַמענדיד צו ראַטעווען סעפּעראַטלי.
אינסטרוקציעס
1.אָפּרוף סיסטעם
| קאַמפּאָונאַנץ | באַנד (μL) | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 2 × מפּ באַפער | 12.5 | 1× |
| ענזיים מיקס | 1 | - |
| אָנפאַנגער / זאָנד מישן (2.5 μM) | 3 | 0.3μם |
| מוסטער רנאַ | 1-10 | - |
| רנאַסע פריי ה2אָ | צו 25 | - |
הערות:
זייט זיכער צו מישן געזונט איידער נוצן, ויסמיידן יבעריק באַבאַלז געפֿירט דורך היציק ווייבריישאַן.
א.אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן: אָנפאַנגער מישן אַרייַנגערעכנט מולטיפּלעקס אָנפאַנגער, דיפּענדינג אויף די סיטואַציע אָפּטימאַל אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן אפֿשר צווישן 0.ל און 1.0μם.
ב.זאָנד קאַנסאַנטריישאַן: זאָנד מישן אַרייַנגערעכנט מולטיפּלעקס זאָנד לייבלינג חילוק פלורעסאַנט גרופּע, דיפּענדינג אויף די סיטואַציע, די אָפּטימאַל זאָנד קאַנסאַנטריישאַן קען זיין צווישן 0.05 און 0.5μם.
ג.מוסטער דיילושאַן: qPCR איז העכסט שפּירעוודיק און עס איז רעקאַמענדיד צו צעפירן די מוסטער.די קאָנטראָל Ct ווערט איז פּאַסיק צווישן 20 און 35.
ד.סיסטעם צוגרייטונג: ביטע צוגרייטן אין די הינטער ריין אַרבעט טיש, און פּיפּעטטער און אָפּרוף רער אָן נוקלעאַסע רעזאַדו;עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן די ביקס קאָפּ מיט פילטער עלעמענט.ויסמיידן קרייַז קאַנטאַמאַניישאַן און אַעראָסאָל קאַנטאַמאַניישאַן.
2. אָפּטימיזעד סייקלינגפּראָטאָקאָל
| ציקל טרעפּל | טעמפּ. | צייַט | סייקאַלז |
| פאַרקערט טראַנסקריפּציע | 50℃א | 20 מינוט | 1 |
| ערשט-דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 5 מינס | 1 |
| אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף | 95℃ | 15 סעק |
40-45 |
| 60℃ b | 30 סעק c |
הערות:
א.פאַרקערט טראַנסקריפּציע: די טעמפּעראַטור קענען אויסקלייַבן 42 °C אָדער 50 °C.
ב.אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף: די טעמפּעראַטור איז אַדזשאַסטיד לויט די טם ווערט פון די דיזיינד פּרימערז.
ג.אַקוואַזישאַן פון פלואָרעססענסע סיגנאַל: ביטע שטעלן די יקספּערמענאַל פּראָצעדור לויט די באדערפענישן פון די מאַנואַל קיילע.
הערות
ביטע טראָגן די נייטיק פּפּע, אַזאַ ווי לאַב מאַנטל און גלאַווז, צו ענשור דיין געזונט און זיכערקייַט.
