ראָבוסטאַרט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע
Robustart Taq DNA פּאָלימעראַסע איז אַ הייס אָנהייב דנאַ פּאָלימעראַסע.דער פּראָדוקט קענען ניט בלויז בעסער ינכיבאַט די ניט-ספּעציפיש אָפּרוף געפֿירט דורך די ניט-ספּעציפיש אַנילינג פון פּרימערז אָדער אָנפאַנגער אַגגרעגאַטיאָן אין דעם פּראָצעס פון צוגרייטונג און אַמפּלאַפאַקיישאַן פון פּקר סיסטעם.דעריבער, עס האט ויסגעצייכנט ספּעסיפיסיטי און איז מער עפעקטיוו פֿאַר די אַמפּלאַפאַקיישאַן פון נידעריק קאַנסאַנטריישאַן טעמפּלאַטעס, און עס איז פּאַסיק פֿאַר מולטיפּלעקסעד פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף.דערצו, דעם פּראָדוקט האט זייער גוט אָנווענדלעך, און סטאַביל אַמפּלאַפאַקיישאַן רעזולטאַטן קענען זיין באקומען אין פאַרשידענע טייפּס פון פּקר ריאַקשאַנז.
קאַמפּאָונאַנץ
1.5 ו / μ ל ראָבוסטאַרט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ פריי) (אַפּשאַנאַל)
3.25 מם מגקל2(אַפּשאַנאַל)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ פריי) טוט נישט אַנטהאַלטן dNTP און Mg²+, ביטע לייגן dNTPs און MgCl2ווען פּריפּערינג די אָפּרוף סיסטעם.
רעקאַמענדיד אַפּפּליקאַטיאָנס
1.שנעל אַמפּלאַפאַקיישאַן.
2.קייפל אַמפּלאַפאַקיישאַן.
3.דירעקט אַמפּלאַפאַקיישאַן פון בלוט, סוואַבז און אנדערע סאַמפּאַלז.
4.דיטעקשאַן פון רעספּעראַטאָרי חולאתן.
סטאָרידזש צושטאַנד
-20 ° C פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש, זאָל זיין געמישט געזונט איידער נוצן, ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ.
*אויב אָפּזאַץ אַקערז נאָך ריפרידזשעריישאַן, עס איז נאָרמאַל;עס איז רעקאַמענדיד צו יקוואַליברייט צו צימער טעמפּעראַטור איידער מיקסינג און נוצן.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַקטיוו אַפּאַראַט (ו) איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים וואָס ינקאָרפּערייט 10 נמאָל פון דעאָקסיריבאָנוקלעאָטידע אין זויער-ינסאַליאַבאַל מאַטעריאַל ביי 74 ° C פֿאַר 30 מינוט ניצן אַקטיווייטיד לאַקס זיירע דנאַ ווי מוסטער / אָנפאַנגער.
קוואַליטעט קאָנטראָל
1.SDS-PAGE ילעקטראָופאָרעטיק ריינקייַט מער ווי 98%.
2.אַמפּלאַפאַקיישאַן סענסיטיוויטי, פּעקל-צו-פּעקל קאָנטראָל, פעסטקייַט.
3.קיין עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע טעטיקייט, קיין עקסאָגענאָוס ענדאָנוקלעאַסע אָדער עקסאָנוקלאַסע קאַנטאַמאַניישאַן
אינסטרוקציעס
רעאַקציע סעטאַפּ
| קאַמפּאָונאַנץ | באנד (μל) | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ פריי)a | 5 | 1× |
| דנטפּס (10 מם יעדער דנטפּ) | 1 | 200 μם |
| 25 מם מגקל2 | 2-8 | 1-4 מם |
| ראָבוסטאַרט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע (5 ו / μ ל) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 יו |
| 25 × אָנפאַנגער מישןב | 2 | 1× |
| מוסטער | - | ＜ 1 μג / אָפּרוף |
| ddH2O | צו 50 | - |
הערות:
1 ) א .דער באַפער טוט נישט אַנטהאַלטן dNTP און Mg²+, ביטע לייגן dNTPs און MgCl2ווען פּריפּערינג די אָפּרוף סיסטעם.
2 ) ב.אויב געניצט פֿאַר qPCR/qRT-PCR, פלורעסאַנט פּראָבעס זאָל זיין מוסיף צו די אָפּרוף סיסטעם.וסואַללי, אַ לעצט אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן פון 0.2 μם וועט געבן גוט רעזולטאַטן;אויב דער אָפּרוף פאָרשטעלונג איז נעבעך, די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אַדזשאַסטיד אין די קייט פון 0.2-1 μM.די זאָנד קאַנסאַנטריישאַן איז יוזשאַוואַלי אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1-0.3 μם.קאַנסאַנטריישאַן גראַדיענט יקספּעראַמאַנץ קענען זיין געטאן צו געפֿינען די בעסטער קאָמבינאַציע פון אָנפאַנגער און זאָנד.
טערמאַל סייקלינג פּראָטאָקאָל
| רעגולער פּקרפּראָצעס | |||
| טרעפּל | טעמפּעראַטור | צייַט | סייקאַלז |
| פאַר-דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 1-5 מינוט | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 10-20 סעק | 40-50 |
| אַנילינג / פאַרלענגערונג | 56-64℃ | 20-60 סעק | |
| שנעל PCRפּראָצעס | |||
| טרעפּל | טעמפּעראַטור | צייַט | סייקאַלז |
| פאַר-דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 30 סעק | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 1-5 סעק | 40-45 |
| אַנילינג / פאַרלענגערונג | 56-64℃ | 5-20 סעק | |
הערות
1.די אַמפּלאַפאַקיישאַן קורס פון שנעל דנאַ פּאָלימעראַסע זאָל נישט זיין ווייניקער ווי 1 קב / 10 ס.די טעמפּעראַטור העכערונג און פאַל קורס, טעמפּעראַטור קאָנטראָל מאָדע און היץ קאַנדאַקשאַן עפעקטיווקייַט פון פאַרשידענע פּקר ינסטראַמאַנץ זענען זייער אַנדערש, אַזוי עס איז רעקאַמענדיד צו אַפּטאַמייז די אָפּטימאַל אָפּרוף טנאָים פֿאַר די ספּעציפיש שנעל פּקר ינסטראַמאַנץ.
2.די סיסטעם איז העכסט אַדאַפּטאַבאַל, מיט העכער ספּעסיפיקאַטי און סענסיטיוויטי.
3.פּאַסיק פֿאַר נוצן ווי פּקר דיטעקשאַן רייידזשאַנץ מיט הויך סענסיטיוויטי, און קענען זיין געוויינט אין מולטיפּלעקס פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן ריאַקשאַנז.
4.5′→3′ פּאָלימעראַסע טעטיקייט, 5′→3′ עקסאָנאָנוקלאַסע טעטיקייט;קיין 3′→5′ עקסאָנאָנוקלאַסע טעטיקייט;קיין פּרופרידינג פֿונקציע.
5.פּאַסיק פֿאַר קוואַליטאַטיווע און קוואַנטיטאַטיווע טעסטינג פון פּקר און רט-פּקר.
6.די 3′ סוף פון די פּקר פּראָדוקט איז א, וואָס קענען זיין גלייך קלאָונד אין אַ ט וועקטאָר.
7.די דריי-שריט אופֿן איז רעקאַמענדיד פֿאַר פּרימערז מיט נידעריק אַנילינג טעמפּעראַטורעס אָדער פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון פראַגמאַנץ מער ווי 200 בפּ.
