וניווערסאַל סיבר גרין קפּקר פּרעמיקס (בלוי)
קאַט נומ: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) איז אַ פאַר-לייזונג פֿאַר 2 × פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן קעראַקטערייזד דורך הויך סענסיטיוויטי און ספּעסיפיקאַטי, איז בלוי אין קאָלירן און האט די ווירקונג פון מוסטער אַדישאַן טרייסינג.די האַרץ קאָמפּאָנענט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע ניצט אַנטיבאָדי הייס אָנהייב צו יפעקטיוולי ינכיבאַט ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן רעכט צו אָנפאַנגער אַנילינג בעשאַס מוסטער צוגרייטונג.אין דער זעלביקער צייט, די פאָרמולע מוסיף די פּראַמאָוטינג סיבות צו פֿאַרבעסערן די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט פון פּקר אָפּרוף און יקוואַלייז די אַמפּלאַפאַקיישאַן פון גענעס מיט פאַרשידענע גק אינהאַלט (30 ~ 70%), אַזוי אַז קוואַנטיטאַטיווע פּקר קענען באַקומען אַ גוט לינעאַר שייכות אין אַ ברייט קוואַנטיטאַטיווע. געגנט.דער פּראָדוקט כּולל ספּעציעל ROX פּאַסיוו רעפערענץ פאַרב, וואָס איז אָנווענדלעך צו רובֿ qPCR ינסטראַמאַנץ.עס איז ניט נייטיק צו סטרויערן די קאַנסאַנטריישאַן פון ROX אויף פאַרשידענע ינסטראַמאַנץ.עס איז בלויז נייטיק צו לייגן פּרימערז און טעמפּלאַטעס צו צוגרייטן די אָפּרוף סיסטעם פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן.
קאַמפּאָונאַנץ
וניווערסאַל בלו קפּקר האר מיקס
סטאָרידזש טנאָים
דער פּראָדוקט איז שיפּט מיט ייַז פּאַקס און קענען זיין סטאָרד ביי -25 ℃ ~ -15 ℃ פֿאַר 18 חדשים.עס איז נייטיק צו ויסמיידן שטאַרק ליכט יריידייישאַן ווען סטאָרינג אָדער פּריפּערינג די אָפּרוף סיסטעם.
ספּעציפיקאַציע
| קאָנצענטראַציע | 2× |
| דעטעקשאַן אופֿן | SYBR |
| פּקר אופֿן | qPCR |
| פּאָלימעראַסע | טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע |
| טיפּ פון מוסטער | דנאַ |
| אַפּפּליקאַטיאָן ויסריכט | רובֿ qPCR ינסטראַמאַנץ |
| פּראָדוקט טיפּ | SYBR פּרעמיקס פֿאַר פאַקטיש-צייט פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר |
| צולייגן צו (אַפּלאַקיישאַן) | גענע עקספּרעססיאָן |
אינסטרוקציעס
1.רעאַקטיאָן סיסטעם
| קאַמפּאָונאַנץ | וואָלאָמע (μL) | וואָלאָמע (μL) | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| וניווערסאַל סיבר גרין קפּקר פּרעמיקס | 25 | 10 | 1× |
| פֿאָרווערטס אָנפאַנגער (10 μמאָל/ל) | 1 | 0.4 | 0.2μמאָל/ל |
| פאַרקערט אָנפאַנגער (10 μמאָל / ל) | 1 | 0.4 | 0.2μמאָל/ל |
| דנאַ | X | X | |
| ddH2O | אַרויף צו 50 | אַרויף צו 20 | - |
[באַמערקונג]: מישן ונ דורך איידער נוצן צו ויסמיידן יבעריק באַבאַלז פון קראַפטיק שאַקינג.
אַ) אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן: די לעצט אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן איז 0.2 μמאָל / ל, און קענען אויך זיין אַדזשאַסטיד צווישן 0.1 און 1.0 μמאָל / ל ווי צונעמען.
ב) מוסטער קאַנסאַנטריישאַן: אויב די מוסטער איז אַנדילוטיד קדנאַ לאַגער לייזונג, דער באַנד געניצט זאָל נישט יקסיד 1/10 פון די גאַנץ באַנד פון די קפּקר אָפּרוף.
c) מוסטער דיילושאַן: עס איז רעקאַמענדיד צו צעפירן די cDNA לאַגער לייזונג מיט 5-10 מאל.די אָפּטימאַל סומע פון מוטיק מוסטער איז בעסער ווען די Ct ווערט באקומען דורך אַמפּלאַפאַקיישאַן איז 20-30 סייקאַלז.
ד) אָפּרוף סיסטעם: עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן 20 μ ל אָדער 50 μ ל צו ענשור די יפעקטיוונאַס און ריפּיטאַביליטי פון ציל דזשין אַמפּלאַפאַקיישאַן.
e) סיסטעם צוגרייטונג: ביטע צוגרייטן אין די סופּער ריין באַנק און נוצן די עצות און אָפּרוף טובז אָן נוקלעאַסע רעזאַדו;עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן די עצות מיט פילטער קאַרטראַדזשאַז.ויסמיידן קרייַז קאַנטאַמאַניישאַן און אַעראָסאָל קאַנטאַמאַניישאַן.
2.אָפּרוף פּראָגראַם
נאָרמאַל פּראָגראַם
| ציקל שריט | טעמפּ. | צייַט | סייקאַלז |
| ערשט דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 2 מין | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 10 סעק | 40 |
| אַנילינג / עקסטענסיאָן | 60℃ | 30 סעק★ | |
| מעלטינג ויסבייג בינע | ינסטרומענט דיפאָלץ | 1 | |
שנעל פּראָגראַם
| ציקל שריט | טעמפּ. | צייַט | סייקאַלז |
| ערשט דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 30 סעק | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 3 סעק | 40 |
| אַנילינג / עקסטענסיאָן | 60℃ | 20 סעק★ | |
| מעלטינג ויסבייג בינע | ינסטרומענט דיפאָלץ | 1 | |
[באַמערקונג]: די שנעל פּראָגראַם איז פּאַסיק פֿאַר די וואַסט מערהייַט פון גענעס, און נאָרמאַל מגילה קענען זיין געפרוווט פֿאַר יחיד קאָמפּלעקס צווייטיק סטרוקטור גענעס.
אַ) אַנילינג טעמפּעראַטור און צייט: ביטע סטרויערן לויט די לענג פון אָנפאַנגער און ציל דזשין.
b) פלואָרעססענסע סיגנאַל אַקוואַזישאַן (★): ביטע שטעלן די יקספּערמענאַל פּראָצעדור לויט די רעקווירעמענץ אין די ינסטראַקשאַנז פֿאַר נוצן פון די קיילע.
c) מעלטינג ויסבייג: די קיילע פעליקייַט פּראָגראַם קענען זיין געוויינט נאָרמאַלי.
3. רעזולטאַט אַנאַליסיס
א מינימום פון דריי בייאַלאַדזשיקאַל רעפּלאַקאַז זענען פארלאנגט פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע יקספּעראַמאַנץ.נאָך דער אָפּרוף, די אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג און מעלטינג ויסבייג דאַרפֿן צו זיין באשטעטיקט.
3.1 אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג:
דער נאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג איז S-שייפּט.קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס איז מערסט פּינטלעך ווען די Ct ווערט פאלן צווישן 20 און 30. אויב Ct ווערט איז ווייניקער ווי 10, עס איז נייטיק צו צעפירן די מוסטער און דורכפירן די פּראָבע ווידער.ווען די Ct ווערט איז צווישן 30-35, עס איז נייטיק צו פאַרגרעסערן די מוסטער קאַנסאַנטריישאַן אָדער די באַנד פון די אָפּרוף סיסטעם, אַזוי צו פֿאַרבעסערן די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און ענשור די אַקיעראַסי פון רעזולטאַט אַנאַליסיס.ווען די Ct ווערט איז העכער ווי 35, די פּראָבע רעזולטאַטן קענען נישט קוואַנטיטאַטיווע אַנאַלייז די אויסדרוק פון די דזשין, אָבער קענען זיין געוויינט פֿאַר קוואַליטאַטיווע אַנאַליסיס.
3.2 מעלטינג ויסבייג:
די איין שפּיץ פון די מעלטינג ויסבייג ינדיקייץ אַז דער אָפּרוף ספּעציפֿיטעט איז גוט און קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס קענען זיין דורכגעקאָכט;אויב די מעלטינג ויסבייג ווייזט טאָפּל אָדער קייפל פּיקס, קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס קענען ניט זיין דורכגעקאָכט.די מעלטינג ויסבייג ווייזט טאָפּל פּיקס, און עס איז נייטיק צו ריכטער צי דער ניט-ציל שפּיץ איז אָנפאַנגער דימער אָדער ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן דורך דנאַ אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס.אויב עס איז אַ אָנפאַנגער דימער, עס איז רעקאַמענדיד צו רעדוצירן די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן אָדער רידיזיין אָנפאַנגער מיט הויך אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט.אויב עס איז ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן, ביטע פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור, אָדער רידיזיין די פּרימערז מיט ספּעסיפיקאַטי.
הערות
ביטע טראָגן די נייטיק פּפּע, אַזאַ לאַב מאַנטל און גלאַווז, צו ענשור דיין געזונט און זיכערקייַט!
דער פּראָדוקט איז בלויז פֿאַר פאָרשונג נוצן!
