פּראָטעינס ק (ליאָפיליזעד פּודער)
קאַט נומ: HC4500A
פּראָטעינעאַסע ק איז אַ סטאַביל סערינע פּראָטעאַסע מיט ברייט סאַבסטרייט ספּעסיפיקאַטי.עס דיגרייד פילע פּראָטעינס אין די געבוירן שטאַט אפילו אין דעם בייַזייַן פון דיטערדזשאַנץ.זאָגן פון קריסטאַל און מאָלעקולאַר סטרוקטור שטודיום ינדיקייץ אַז די ענזיים געהערט צו די סובטיליסין משפּחה מיט אַן אַקטיוו פּלאַץ קאַטאַליטיק טריאַד (Asp)39— זיין69- סער224).די פּרידאַמאַנאַנט פּלאַץ פון קלעאַוואַגע איז די פּעפּטייד בונד שכייניש צו די קאַרבאָקסיל גרופּע פון אַלפאַטיק און עראַמאַטיק אַמינאָ אַסאַדז מיט אפגעשטעלט אַלף אַמינאָ גרופּעס.עס איז קאַמאַנלי געניצט פֿאַר זייַן ברייטספּעציפֿישקייט.
סטאָרידזש טנאָים
2-8 ℃ קורץ-טערמין סטאָרידזש, -25 ~ -15 ℃ לאַנג-טערמין סטאָרידזש.טרוקן פּודער סטאַטוס -25 ~ -15 ℃ גילטיק פֿאַר 3 יאר;די ענזיים פּודער זאָל זיין צעלאָזן אין די צונעמען באַנד.
ספּעציפיקאַציע
| אויסזען | ווייַס צו אַוועק-ווייַס אַמאָרפאַס ליאָפיליזעד פּודער |
| אַקטיוויטעט | ≥30 ו/מג |
| דנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
| רנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
פּראָפּערטיעס
| עק נומער | 3.4.21.64 (רעקאָמבינאַנט פֿון Tritirachium אלבאם) |
| מאָלעקולאַר וואָג | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| יסאָעלעקטריק פונט | 7.81 |
| אָפּטימום ף | 7.0-12.0 פיג.1 |
| אָפּטימום טעמפּעראַטור | 65 ℃ פיג.2 |
| ף פעסטקייַט | ף 4.5-12.5 (25℃, 16ה) פיג.3 |
| טערמאַל פעסטקייַט | אונטער 50℃ (pH 8.0, 30מין) פיג.4 |
| אַקטיוואַטאָרס | SDS, ורעאַ |
| ינכיבאַטערז | דייסאָפּראָפּיל פלואָראָפאָספאַטע;פענילמעטהילסולפאָניל פלאָרייד |
אַפּפּליקאַטיאָנס
1. גענעטיק דיאַגנאָסטיק קיט
2. רנאַ און דנאַ יקסטראַקשאַן קיץ
3. יקסטראַקשאַן פון ניט-פּראָטעין קאַמפּאָונאַנץ פון געוועבן, דערנידעריקונג פון פּראָטעין ימפּיוראַטיז, אַזאַ ווי דנאַ וואַקסינז און צוגרייטונג פון העפּאַרין
4. צוגרייטונג פון כראָמאָסאָם דנאַ דורך פּולסעד עלעקטראָפאָרעסיס
5. מערב בלאָט
6. ענזימאַטיק גלייקאַסילאַטעד אַלבומין רעאַגענץ אין וויטראָ דיאַגנאָסיס
מאסנאמען
טראָגן פּראַטעקטיוו גלאַווז און ברילן ווען איר נוצן אָדער ווייינג, און האַלטן געזונט ווענאַלייטיד נאָך נוצן.דער פּראָדוקט קען פאַרשאַפן הויט אַלערדזשיק אָפּרוף און ערנסט אויג יריטיישאַן.אויב ינכיילד, עס קען פאַרשאַפן אַלערגיע אָדער אַזמאַ סימפּטאָמס אָדער דיספּנעאַ.מייַ גרונט רעספּעראַטאָרי יריטיישאַן.
Assay
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט (ו) איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו כיידראַליזירן קייסין צו פּראָדוצירן 1 μמאָל טיראָסינע פּער מינוט אונטער די פאלגענדע טנאָים.
צוגרייטונג פון רעאַגענץ
רעאַגענט איך: 1 ג מילך קייסין איז צעלאָזן אין 50 מל פון 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג (pH 8.0), ינקובייטיד אין 65-70 ℃ וואַסער פֿאַר 15 מינוט, סטערד און צעלאָזן, קולד דורך וואַסער, אַדזשאַסטיד דורך סאָדיום כיידראַקסייד צו ף 8.0, און פאַרפעסטיקט באַנד 100 מל.
רעאַגענט וו: 0.1 ם טריטשלאָראָאַסעטיק זויער, 0.2 ם סאָדיום אַסאַטייט, 0.3 ם אַסעטיק זויער.
רעאַגענט ווו: 0.4 ם נאַ2CO3לייזונג.
רעאַגענט יוו: פאָרינט רייידזשאַנט דיילוטאַד מיט ריין וואַסער פֿאַר 5 מאל.
רעאַגענט V: ענזיים דילוענט: 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג (pH 8.0).
רעאַגענט ווי: טיראָסינע לייזונג: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 ומאָל/מל טיראָסינע צעלאָזן מיט 0.2 ם הקל.
פּראָצעדור
1. 0.5 מל פון רייידזשאַנט איך איז פאַר-וואָרמד צו 37 ℃, לייגן 0.5 מל פון ענזיים לייזונג, מישן געזונט און ינגקיובייט בייַ 37 ℃ פֿאַר 10 מינוט.
2. לייג 1 מל פון רעאַגענט וו צו האַלטן די אָפּרוף, מישן געזונט און פאָרזעצן ינגקיוביישאַן פֿאַר 30 מינוט.
3. סענטריפוגאַטע אָפּרוף לייזונג.
4. נעמען 0.5 מל סופּערנאַטאַנט, לייגן 2.5 מל רייידזשאַנט ווו, 0.5 מל רייידזשאַנט יוו, מישן געזונט און ינקובייט בייַ 37 ℃ פֿאַר 30 מינוט.
5. אָד660איז באשלאסן ווי OD1;ליידיק קאָנטראָל גרופּע: 0.5 מל רייידזשאַנט V איז געניצט צו פאַרבייַטן ענזיים לייזונג צו באַשטימען אָד660ווי OD2, ΔOD=OD1-אָד2.
6. ל-טיראָסין נאָרמאַל ויסבייג: 0.5 מל פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן ל טיראָסינע לייזונג, 2.5 מל רעאַגענט ווו, 0.5 מל רעאַגענט יוו אין 5 מל סענטריפודזש רער, ינגקיובייט אין 37 ℃ פֿאַר 30 מינוט, דעטעקט פֿאַר אָד.660פֿאַר פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן פון ל-טיראָסין, דעמאָלט באקומען די נאָרמאַל ויסבייג Y=kX+b, ווו י איז די ל-טיראָסין קאַנסאַנטריישאַן, X איז OD600.
קאַלקולאַטיאָן
2: גאַנץ באַנד פון אָפּרוף לייזונג (מל)
0.5: באַנד פון ענזיים לייזונג (מל)
0.5: רעאַקציע פליסיק באַנד געניצט אין טשראָמאָגעניק פעסטקייַט (מל)
10: אָפּרוף צייט (מין)
Df: דילוטיאָן קייפל
C: ענזיים קאַנסאַנטריישאַן (מג / מל)
רעפערענצן
1. וויגער ו & הילז ה. פעבס לעט.(1972); 23:77.
2. וויגער ו & הילז ה ביאָטשעם.ביאָפיס.רעז.קאָממוניק.(1971);44:513.
3 הילז , ה .עט על.,עור.י ביאָטשעם.(1975); 56: 103-108.
4. Sambrook Jet על., מאָלעקולאַר קלאָונינג: א לאַבאָראַטאָריע מאַנואַל, 2nd אַדישאַן, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
פייג 2 אָפּטימום טעמפּעראַטור
אָפּרוף אין 20 מם ק-פאָספאַטע באַפער ף 8.0.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
פיגורע קסנומקס פּה פעסטקייַט
25 ℃, 16 ה-באַהאַנדלונג מיט 50 מם באַפער לייזונג: ף 4.5-5.5, אַסעטאַטע;ף 6.0-8.0, נאַ-פאָספאַטע;ף 8.0-9.0, טריס-הקל.ף 9.0-12.5, גלייסין-נאַאָה.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
פיגורע 4 טערמאַל פעסטקייַט
30 מינוט באַהאַנדלונג מיט 50 מם טריס-הקל באַפער, pH 8.0.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
פיגורע 5 סטאָרידזש stability at 25℃
