2× Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
קאַט נומ: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) איז דיזיינד צו דורכפירן פּקר גלייך פֿון סאַמפּאַלז אָן דנאַ יקסטראַקשאַן אָדער מוסטער צוגרייטונג.דער רייידזשאַנט באשטייט פון הייס-אָנהייב דנאַ פּאָלימעראַסע, וראַסיל דנאַ גליקאָסילאַסע (UNG), רנאַסע ינכיבאַטער, מגקל2, דנטפּס (מיט דוטפּ אַנשטאָט פון דטטפּ), און סטייבאַלייזערז, פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע פּקר (קפּקר).דער רייידזשאַנט פּריפאָרמז הויך ינכיבאַטער-טאָלעראַנץ, און אַזוי עס קענען זיין גלייך געווענדט צו די דיטעקשאַן פון סאַמפּאַלז ווי האַלדז ווישער, שפּייַעכץ, אַנטי-קאָאַגולאַטעד גאַנץ בלוט, פּלאַזמע און סערום אָן דנאַ יקסטראַקשאַן.דער רייידזשאַנט ניצט פּראַפּרייאַטערי באַפער פֿאַר qPCR מיט געמישט ענזימעס פון אַנטי-ינכיבאַטאָרי דנאַ פּאָלימעראַסע און UNG ענזיים.דעריבער, עס קענען באַקומען אַ גוט אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ציל גענעס אין סאַמפּאַלז מיט ינכיבאַטערז און ינכיבאַט פאַלש positive אַמפּלאַפאַקיישאַן געפֿירט דורך פּקר ריזידזשואַל און אַעראָסאָל פאַרפּעסטיקונג.דער רייידזשאַנט איז קאַמפּאַטאַבאַל מיט רובֿ פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ, אַזאַ ווי אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס, Eppendorf, Bio-Rad, Roche און אַזוי אויף.
קאַמפּאָונאַנץ
1. 50 × סענסידירעקט ענזיים / UNG מיקס
2. 2 × SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
סטאָרידזש טנאָים
אַלע קאַמפּאָונאַנץ זאָל זיין געהאלטן ביי -20 ℃ פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש און 4 ℃ פֿאַר אַרויף צו 3 חדשים.ביטע מישן ונ דורך נאָך טאָינג און סענטריפודזש איידער ניצן.ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ.
סייקלינג פּראָטאָקאָל
| טרעפּל | טעמפּעראַטור | צייַט | ציקל |
| דיידזשעסטשאַן | 50℃ | 2מין | 1 |
| פּאָלימעראַסע אַקטאַוויישאַן | 95℃ | 1-5מין | 1 |
| דענאַטורע | 95℃ | 10-20 ס | 40-50 |
| אַנילינג / עקסטענסיאָן | 56-64℃ | 20-60 ס |
פּיפּעטטינג אינסטרוקציעס
| רעאַגענט | באַנד פּער אָפּרוף | באַנד פּער אָפּרוף | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 2 × SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5 μ ל | 25μל | 1× |
| 50 × סענסידירעקט ענזיים / UNG מיקס | 0.5μל | 1μל | 1× |
| 25 × אָנפאַנגער-זאָנד מיקס1 , 2 | 1μל | 2μל | 1× |
| מוסטער3 , 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| גאַנץ באַנד | 25 μל | 50 μל | - |
1. די לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער איז יוזשאַוואַלי 0.2μם.פֿאַר בעסער רעזולטאַטן, די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.2-1μם.
2. אין אַלגעמיין, די זאָנד קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1-0.3μם.די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן פון די פּראָבע איז שייך צו די פאַקטיש-צייט PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן ינסטרומענט, די טיפּ פון זאָנד און די טיפּ פון פלורעסאַנט לייבלינג מאַטעריע.ביטע אָפּשיקן צו די מאַנואַל פון די ינסטרומענט אָדער די ספּעציפיש רעקווירעמענץ פון יעדער פלורעסאַנט זאָנד.
3. פאַרשידענע טייפּס פון סאַמפּאַלז אַנטהאַלטן פאַרשידענע טייפּס און אינהאַלט פון ינכיבאַטער און קאָפּיע נומער פון ציל דזשין.דער מוסטער באַנד זאָל זיין קאַנסידערד דורך פאַקטיש צושטאַנד.מאַכן אַ דיילושאַן פון די מוסטער דורך אַדינג נוקלעאַסע-פֿרייַ וואַסער אָדער TE Buffer, אויב נייטיק.
4. רעקאַמענדיד באַנד פון פאַרשידענע סאַמפּאַלז:
| מוסטער | באַנד פֿאַר איין 50 μל אָפּרוף | מאַקסימום פאַרהעלטעניש |
| אַנטיקאָאַגולאַטעד גאַנץ בלוט | 2.5 μל | 5% |
| פּלאַזמע | 15 μל | 30% |
| סערום | 10 μל | 20% |
| האַלדז ווישער | 10 μל | 20% |
| שפּייַעכץ | 10 μל | 20% |
קוואַליטעט קאָנטראָל
1. פֿונקציע דיטעקשאַן: סענסיטיוויטי, ספּעסיפיסיטי און ריפּיטאַביליטי פון קפּקר.
2. קיין עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע טעטיקייט: קיין עקסאָגענאָוס ענדאָנוקלעאַסע און עקסאָנוקלעאַסע פאַרפּעסטיקונג.
הערות פון פּראָדוקט
1. דעם פּראָדוקט ימפּלויז אַ ראָמאַן טיפּ פון הייס-אָנהייב דנאַ פּאָלימעראַסע, וואָס קענען זיין אַקטיווייטיד אין 1-5 מינוט. זינט זייַן אָפּרוף באַפער איז אָפּטימיזעד, עס איז מער פּאַסיק פֿאַר טאָפּל אָדער קייפל פלורעסאַנס קוואַנטיטאַטיווע פּקר ניצן זאָנד אופֿן.
2. אויב די רן ווערט פון די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן איז צו נידעריק אָדער די אַמפּלאַפאַקיישאַן איז דאָך ינכיבאַטיד, דיקריסינג די מוסטער סומע, ינקריסינג אָפּרוף באַנד אָדער די פריערדיקע דיילושאַן פון די מוסטער קען פֿאַרבעסערן די רעזולטאַטן.
3. די זאַמלונג פון בלוט, שפּייַעכץ, פּישעכץ, האַלדז ווישער, אאז"ו ו זאָל נאָכגיין די קליניש קרייטיריאַ רעקווירעמענץ, און פריש מוסטער קענען זיין געניצט צו פאַרמייַדן דיגריישאַן פון נוקלעיק זויער.
4. זינט פאַרשידענע אַמפּליקאָנס האָבן פאַרשידענע יוטאַלאַזיישאַן עפעקטיווקייַט צו דוטפּ און סענסיטיוויטי צו UNG, די רייידזשאַנץ זאָל זיין אָפּטימיזעד אויב די דיטעקשאַן סענסיטיוויטי דיקריסאַז ווען ניצן UNG סיסטעם.ביטע קאָנטאַקט אונדז פֿאַר טעכניש שטיצן אויב דארף.
5. צו ויסמיידן אַמפּלאַפאַקיישאַן פון טראַנספּערטיישאַן פּקר פּראָדוקטן צווישן איין-שריט ריאַקשאַנז, דעדאַקייטאַד יקספּערמענאַל געגנט און פּייפּעט זענען פארלאנגט פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אַרבעטן מיט גלאַווז און אָפט טוישן און טאָן ניט עפענען די אָפּרוף רער נאָך פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.
