מויז גענאָטיפּינג קיט
קאַט נומ: HCR2021A
דער פּראָדוקט איז אַ קיט דיזיינד פֿאַר די גיך לעגיטימאַציע פון מויז גענאָטיפּעס, אַרייַנגערעכנט דנאַ גראָב יקסטראַקשאַן און פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן סיסטעם.דער פּראָדוקט קענען זיין געוויינט פֿאַר פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן גלייך פֿון מויז עק, אויער, פינגער פונ פוס און אנדערע געוועבן נאָך פּשוט קלעאַוואַגע דורך ליסיס באַפער און פּראָטעינאַסע ק.קיין יבערנאַכטיק דיידזשעסטשאַן, פענאָל-טשלאָראָפאָרם יקסטראַקשאַן אָדער זייַל רייניקונג, וואָס איז פּשוט און פאַרקירצן די צייט קאַנסומינג יקספּעראַמאַנץ.דער פּראָדוקט איז פּאַסיק פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ציל פראַגמאַנץ אַרויף צו 2 קב און מולטיפּלעקס פּקר ריאַקשאַנז מיט אַרויף צו 3 פּערז פון פּרימערז.די 2 × מאַוס געוועב דירעקט פּקר מיקס כּולל דזשאַנעטיקלי ענדזשאַנירד דנאַ פּאָלימעראַסע, Mg2+, דנטפּס און אַ אָפּטימיזעד באַפער סיסטעם צו צושטעלן הויך אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און ינכיבאַטער טאָלעראַנץ, אַזוי אַז פּקר ריאַקשאַנז קענען זיין דורכגעקאָכט דורך אַדינג מוסטער און אָנפאַנגערס און ריכיידרייטינג די פּראָדוקט צו 1 ×.די פּקר פּראָדוקט אַמפּלאַפייד מיט דעם פּראָדוקט האט אַ באַוווסט "א" באַזע אין די 3′ סוף און קענען זיין געוויינט גלייַך פֿאַר טאַ קלאָונינג נאָך רייניקונג.
קאַמפּאָונאַנץ
| קאָמפּאָנענט | גרייס |
| 2 × מאַוס געוועב דירעקט פּקר מיקס | 5 × 1.0 מל |
| ליסיס באַפער | 2 × 20 מל |
| Proteinase K | 800μל |
סטאָרידזש טנאָים
פּראָדוקטן זאָל זיין סטאָרד בייַ -25 ~ -15 ℃ פֿאַר 2 יאָר.נאָך טאָינג, ליסיס באַפער קענען זיין סטאָרד בייַ 2 ~ 8 ℃ פֿאַר קורץ-טערמין קייפל נוצן, און מישן געזונט ווען איר נוצן.
אַפּפּליקאַטיאָן
דער פּראָדוקט איז פּאַסיק פֿאַר מויז נאַקאַוט אַנאַליסיס, טראַנסגעניק דיטעקשאַן, גענאָטיפּינג און אַזוי אויף.
איינריכטונגען
1.פּשוט אָפּעראַציע: ניט דאַרפֿן צו עקסטראַקט גענאָמיק דנאַ;
2.ברייט אַפּלאַקיישאַן: פּאַסיק פֿאַר דירעקט אַמפּלאַפאַקיישאַן פון פאַרשידן מויז געוועבן.
אינסטרוקציעס
1.מעלדונג פון גענאָמיק דנאַ
1) צוגרייטונג פון ליסאַטע
געוועב ליסאַטע איז צוגעגרייט לויט די נומער פון מויז סאַמפּאַלז צו זיין ליסעד (געוועב ליסאַטע זאָל זיין צוגעגרייט אויף-פּלאַץ לויט די דאָוסאַדזש און געמישט ונ דורך פֿאַר נוצן), און די פּראָפּאָרציע פון ריאַגאַנץ פארלאנגט פֿאַר אַ איין מוסטער איז ווי גייט:
| קאַמפּאָונאַנץ | באַנד (μL) |
| Proteinase K | 4 |
| ליסיס באַפער | 200 |
2) מוסטער צוגרייטונג און ליסיס
רעקאָממענדעד געוועב נוצן
| טיפּ פוןגעוועב | רעקאַמענדיד באַנד |
| מויז עק | 1-3מם |
| מויז אויער | 2-5מם |
| מויז פינגער פונ פוס | 1-2 ברעקלעך |
נעמען אַ צונעמען סומע פון מויז געוועב סאַמפּאַלז אין ריין סענטריפודזש טובז, לייגן 200 μ ל פריש געוועב ליסאַטע צו יעדער סענטריפודזש רער, וואָרטעקס און טרייסלען, דעמאָלט ינקובייט ביי 55 ℃ פֿאַר 30 מינוט, און היץ ביי 98 ℃ פֿאַר 3 מינוט.
3 ) צענטריפוגאציע
שאָקלען די ליסאַטע געזונט און סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם פֿאַר 5 מינוט.די סופּערנאַטאַנט קענען זיין געוויינט ווי אַ מוסטער פֿאַר פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אויב דער מוסטער איז דארף פֿאַר סטאָרידזש, אַריבערפירן די סופּערנאַטאַנט צו אן אנדער סטערילע סענטריפודזש רער און קראָם ביי -20 ℃ פֿאַר 2 וואָכן.
2.PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן
אַראָפּנעמען די 2 × מאַוס געוועב דירעקט פּקר מיקס פון -20 ℃ און טאָ אויף אייז, מישן קאַפּויער און צוגרייטן די פּקר אָפּרוף סיסטעם לויט די פאלגענדע טיש (אַרבעט אויף אייז):
| קאַמפּאָונאַנץ | 25μלסיסטעם | 50μלסיסטעם | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 2 × מאַוס געוועב דירעקט פּקר מיקס | 12.5μל | 25μל | 1× |
| אָנפאַנגער 1 (10μם) | 1.0μל | 2.0μל | 0.4μם |
| אָנפאַנגער 2 (10μם) | 1.0μל | 2.0μל | 0.4μם |
| קלאַוויאַטור פּראָדוקטa | ווי פארלאנגט | ווי פארלאנגט |
|
| ddH2O | אַרויף צו 25μל | אַרויף צו 50 μ ל |
|
נאטיץ:
אַ) די סומע צוגעלייגט זאָל נישט יקסיד 1/10 פון די סיסטעם, און אויב צו פיל איז צוגעגעבן, פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן קען זיין ינכיבאַטיד.
רעקאָממענדעד פּקר קאָנדיטיאָנס
| ציקל שריט | טעמפּ. | צייַט | סייקאַלז |
| ערשט דענאַטוראַטיאָן | 94℃ | 5 מינס | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 94℃ | 30 סעק | 35-40 |
| אַנילינגa | טמ+3~5℃ | 30 סעק | |
| פאַרלענגערונג | 72℃ | 30 סעק / קב | |
| לעצט פאַרלענגערונג | 72℃ | 5 מינס | 1 |
| - | 4℃ | האלט | - |
נאטיץ:
אַ) אַנילינג טעמפּעראַטור: מיט דערמאָנען צו די טם ווערט פון די אָנפאַנגער, עס איז רעקאַמענדיד צו שטעלן די אַנילינג טעמפּעראַטור צו דער קלענערער טם ווערט פון די אָנפאַנגער +3 ~ 5 ℃.
פּראָסט פּראָבלעמס און סאַלושאַנז
1.קיין טאַרגעטעד סטריפּס
1) יבעריק ליסיס פּראָדוקט.קלייַבן די מערסט צונעמען נומער פון מוסטער, יוזשאַוואַלי ניט מער ווי 1/10 פון די סיסטעם;
2) צו גרויס מוסטער גרייס.צעפירן די ליסאַטע 10 מאל און דעמאָלט פאַרשטאַרקן, אָדער רעדוצירן די מוסטער גרייס און שייַעך-ליסיס;
3) געוועב סאַמפּאַלז זענען נישט פריש.עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן פריש געוועב סאַמפּאַלז;
4) נעבעך אָנפאַנגער קוואַליטעט.ניצן גענאָמיק דנאַ פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן צו באַשטעטיקן די אָנפאַנגער קוואַליטעט און אַפּטאַמייז די אָנפאַנגער פּלאַן.
2.ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן
1) די אַנילינג טעמפּעראַטור איז צו נידעריק און די ציקל נומער איז צו הויך.פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור און רעדוצירן די נומער פון סייקאַלז;
2) מוסטער קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך.רעדוצירן די סומע פון מוסטער אָדער צעפירן די מוסטער 10 מאל נאָך אַמפּלאַפאַקיישאַן;
3) נעבעך אָנפאַנגער ספּעסיפיקאַטי.אָפּטימיזירן די אָנפאַנגער פּלאַן.
הערות
1.אין סדר צו ויסמיידן קרייַז קאַנטאַמאַניישאַן צווישן סאַמפּאַלז, קייפל מוסטערונג מכשירים זאָל זיין צוגעגרייט, און די ייבערפלאַך פון די מכשירים קענען זיין קלינד מיט 2% סאָדיום היפּאָטשלאָריט לייזונג אָדער נוקלעיק זויער קלינער נאָך יעדער מוסטערונג אויב ריפּיטיד נוצן איז פארלאנגט.
2.עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן פריש מויז געוועבן, און די מוסטערונג באַנד זאָל נישט זיין צו גרויס צו ויסמיידן אַפעקטינג די אַמפּלאַפאַקיישאַן רעזולטאַטן.
3.ליסיס באַפער זאָל ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ און קענען זיין סטאָרד בייַ 2 ~ 8 ℃ פֿאַר קורץ-טערמין קייפל נוצן.אויב סטאָרד אין נידעריק טעמפּעראַטור, אָפּזאַץ קען פּאַסירן, און מוזן זיין גאָר צעלאָזן איידער נוצן.
4.פּקר מיקס זאָל ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ, און קענען זיין סטאָרד בייַ 4 ℃ פֿאַר קורץ-טערמין ריפּיטיד נוצן.
5.דער פּראָדוקט איז בלויז פֿאַר וויסנשאפטלעכע יקספּערמענאַל פאָרשונג און זאָל ניט זיין געוויינט אין קליניש דיאַגנאָסיס אָדער באַהאַנדלונג.
