פּראָטעינסע ק mNGS (פליסיק)
פּראָטעינעאַסע ק איז אַ סטאַביל סערינע פּראָטעאַסע מיט ברייט סאַבסטרייט ספּעסיפיקאַטי.עס דיגרייד פילע פּראָטעינס אין די געבוירן שטאַט אפילו אין דעם בייַזייַן פון דיטערדזשאַנץ.זאָגן פון קריסטאַל און מאָלעקולאַר סטרוקטור שטודיום ינדיקייץ אַז די ענזיים געהערט צו די סובטיליסין משפּחה מיט אַן אַקטיוו פּלאַץ קאַטאַליטיק טריאַד (Asp)39— זיין69— סער224).די פּרידאַמאַנאַנט פּלאַץ פון קלעאַוואַגע איז די פּעפּטייד בונד שכייניש צו די קאַרבאָקסיל גרופּע פון אַלפאַטיק און עראַמאַטיק אַמינאָ אַסאַדז מיט אפגעשטעלט אַלף אַמינאָ גרופּעס.עס איז קאַמאַנלי געניצט פֿאַר זייַן ברייט ספּעסיפיקאַטי.דעם פּראָטעינעאַסע ק איז ספּעשאַלי דיזיינד פֿאַר mNGS.קאַמפּערד מיט די אנדערע פּראָטעינס ק, עס כּולל אפילו ווייניקער נוקלעיק זויער קאַנטאַמאַניישאַן מיט דער זעלביקער ענזימאַטיק פאָרשטעלונג, וואָס קען בעסער ענשור די דאַונסטרים mNGS אַפּלאַקיישאַן.
סטאָרידזש טנאָים
2-8 ℃ פֿאַר 2 יאָר
ספּעציפיקאַציע
| אויסזען | בלאַס צו ליכט ברוין פליסיק |
| אַקטיוויטעט | ≥800 ו/מל |
| פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַן | ≥20 מג / מל |
| ניקאסע | קיינער דיטעקטאַד |
| דנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
| רנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
פּראָפּערטיעס
| עק נומער | 3.4.21.64(רעקאָמבינאַנט פֿון Tritirachium אלבאם) |
| יסאָעלעקטריק פונט | 7.81 |
| אָפּטימום ף | 7.0- 12.0 פיגורע 1 |
| אָפּטימום טעמפּעראַטור | 65 ℃ פיג. 2 |
| ף פעסטקייַט | ף 4.5-12.5 (25 ℃, 16 ה) פייג. 3 |
| טערמאַל פעסטקייַט | אונטער 50 ℃ (פּה 8.0, 30 מין) פיג. 4 |
| סטאָרידזש פעסטקייַט | איבער 90% טעטיקייט פֿאַר 12 חדשים ביי 25 ℃ |
| אַקטיוואַטאָרס | SDS, ורעאַ |
| ינכיבאַטערז | דייסאָפּראָפּיל פלואָראָפאָספאַטע;פענילמעטהילסולפאָניל פלאָרייד |
אַפּפּליקאַטיאָנס
1. גענעטיק דיאַגנאָסטיק קיט
2. רנאַ און דנאַ יקסטראַקשאַן קיץ
3. יקסטראַקשאַן פון ניט-פּראָטעין קאַמפּאָונאַנץ פון געוועבן, דערנידעריקונג פון פּראָטעין ימפּיוראַטיז, אַזאַ ווי דנאַוואַקסינז און צוגרייטונג פון העפּאַרין
4. צוגרייטונג פון כראָמאָסאָם דנאַ דורך פּולסעד עלעקטראָפאָרעסיס
5. מערב בלאָט
6. ענזימאַטיק גלייקאַסילאַטעד אַלבומין רעאַגענץ אין וויטראָ דיאַגנאָסיס
מאסנאמען
טראָגן פּראַטעקטיוו גלאַווז און ברילן ווען איר נוצן אָדער ווייינג, און האַלטן געזונט ווענאַלייטיד נאָך נוצן.דער פּראָדוקט קען פאַרשאַפן הויט אַלערדזשיק אָפּרוף און ערנסט אויג יריטיישאַן.אויב ינכיילד, עס קען פאַרשאַפן אַלערגיע אָדער אַזמאַ סימפּטאָמס אָדער דיספּנעאַ.מייַ גרונט רעספּעראַטאָרי יריטיישאַן.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט (ו) איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו כיידראַליזירן קייסין צו פּראָדוצירן 1 μמאָלטיראָסינע פּער מינוט אונטער די פאלגענדע טנאָים.
צוגרייטונג פון רעאַגענץ
רעאַגענט איך: 1 ג מילך קייסין איז צעלאָזן אין 50 מל פון 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג (pH 8.0), ינקובייטיד אין 65-70 ℃ וואַסער פֿאַר 15 מינוט, סטערד און צעלאָזן, קולד דורך וואַסער, אַדזשאַסטיד דורך סאָדיום כיידראַקסייד צו ף 8.0, און פאַרפעסטיקט באַנד 100 מל.
רעאַגענט וו: 0.1 ם טריטשלאָראָאַסעטיק זויער, 0.2 ם סאָדיום אַסאַטייט, 0.3 ם אַסעטיק זויער.
רעאַגענט ווו: 0.4 ם נאַ2CO3לייזונג.
רעאַגענט יוו: פאָרינט רייידזשאַנט דיילוטאַד מיט ריין וואַסער פֿאַר 5 מאל.
רעאַגענט V: ענזיים דיילוענט: 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג (pH 8.0).
רעאַגענט ווי: טיראָסינע לייזונג: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 ומאָל / מל טיראָסינע צעלאָזן מיט 0.2מ הקל.
פּראָצעדור
1. 0.5 מל פון רייידזשאַנט איך איז פאַר-וואָרמד צו 37 ℃, לייגן 0.5 מל פון ענזיים לייזונג, מישן געזונט און ינקובייט ביי37 ℃ פֿאַר 10 מינוט.
2. לייג 1 מל פון רעאַגענט וו צו האַלטן די אָפּרוף, מישן געזונט און פאָרזעצן ינגקיוביישאַן פֿאַר 30 מינוט.
3. סענטריפוגאַטע אָפּרוף לייזונג.
4. נעמען 0.5 מל סופּערנאַטאַנט, לייגן 2.5 מל רייידזשאַנט ווו, 0.5 מל רייידזשאַנט יוו, מישן געזונט און ינקובייט ביי 37 ℃פֿאַר 30 מינוט.
5. אָד660איז באשלאסן ווי OD1;ליידיק קאָנטראָל גרופּע: 0.5 מל רעאַגענט V איז געניצט צו פאַרבייַטן ענזייםלייזונג צו באַשליסן אָד660ווי OD2, ΔOD=OD1-אָד2.
6. ל-טיראָסין נאָרמאַל ויסבייג: 0.5 מל פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן ל-טיראָסין לייזונג, 2.5 מל רעאַגענט ווו, 0.5 מל רעאַגענט יוו אין 5 מל סענטריפודזש רער, ינגקיובייט אין 37 ℃ פֿאַר 30 מינוט, דעטעקט פֿאַר אָד.660פֿאַר פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן פון ל-טיראָסין, דעמאָלט באקומען די נאָרמאַל ויסבייג י=קקס+ב, ווו י איז די ל-טיראָסין קאַנסאַנטריישאַן, X איז אָד600.
קאַלקולאַטיאָן
2: גאַנץ באַנד פון אָפּרוף לייזונג (מל)
0.5: באַנד פון ענזיים לייזונג (מל)
0.5: רעאַקציע פליסיק באַנד געניצט אין טשראָמאָגעניק פעסטקייַט (מל)
10: אָפּרוף צייט (מין)
Df: דילוטיאָן קייפל
C: ענזיים קאַנסאַנטריישאַן (מג / מל)
רעפערענצן
1. וויגער ו & הילז ה. פעבס לעט.(1972);23:77.
2. וויגער ו & הילז ה ביאָטשעם.ביאָפיס.רעז.קאָממוניק.(1971);44:513.
3 הילז , ה .עט על.,עור.י ביאָטשעם.(1975);56:103-108.
4. Sambrook Jet על., מאָלעקולאַר קלאָונינג: א לאַבאָראַטאָריע מאַנואַל, 2 אַדישאַן, קאַלט ספּרינג האַרבאָרלאַבאָראַטאָריע פרעסע, קאַלט ספּרינג האַרבאָר (1989).
פיגיערז
פיג.1 בעסטער pH
100מם באַפער לייזונג: pH6.0-8.0, נאַ-פאָספאַטע;pH8.0-9.0, טריס-הקל;ף9.0-12.5, גלייסין-נאַאָה. ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1מג/מל
פיג.2 אָפּטימום טעמפּעראַטור
אָפּרוף אין 20 מם ק-פאָספאַטע באַפער ף 8.0.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
Fig.3 pH פעסטקייַט
25 ℃, 16 ה-באַהאַנדלונג מיט 50 מם באַפער לייזונג: ף 4.5-5.5, אַסעטאַטע;ף 6.0-8.0, נאַ-פאָספאַטע;ף 8.0-9.0, טריס-הקל.ף 9.0-12.5, גלייסין-נאַאָה.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
פיג.4 טערמאַל פעסטקייַט
30 מינוט באַהאַנדלונג מיט 50 מם טריס-הקל באַפער, pH 8.0.ענזיים קאַנסאַנטריישאַן: 1 מג / מל
פיג.5 סטאָרידזש stability at 25℃
