5×נעאָסקריפּט פאַסט רט-קפּקר פּרעמיקס פּלוס-ונג
קאַט נומ: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) איז אַ העכסט סטאַביל איין-רער זאָנד-באזירט מישן פּאַסיק פֿאַר איין-שריט פאַרקערט טראַנסקריפּציע און קוואַנטיטאַטיווע פּקר (qRT-PCR).עס שטיצט פאַר-מיקסינג פון אָנפאַנגער און פּראָבעס און בלייבן סטאַביל נאָך לאַנג סטאָרידזש אין נידעריק טעמפּעראַטור.דער מוסטער צו זיין טעסטעד קענען זיין מוסיף גלייך ווען איר נוצן, אָן נאָך עפן / פּיפּעטטינג אָפּעראַציע.דער פּראָדוקט גיט קאַמפּאָונאַנץ אַזאַ ווי הייס-אָנהייב דנאַ פּאָלימעראַסע, M-MLV, היץ-לאַביל וראַסיל דנאַ גלייקאָסילאַסע (TS-UNG), רנאַסע ינכיבאַטער, מגקל2, דנטפּס (מיט דוטפּ אַנשטאָט פון דטטפּ), און סטייבאַלייזערז.מיט די דזשאַנעטיקלי מאַדאַפייד גיך אַמפּלאַפאַקיישאַן פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע און דנאַ פּאָלימעראַסע, עס איז מעגלעך צו פאַרענדיקן די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן ין 20-40 מינוט.דער רייידזשאַנט ניצט ספּעציעל באַפער פֿאַר qPCR מיט געמישט ענזימעס פון אַנטי-ינכיבאַטאָרי אַמפּלאַפאַקיישאַן ענזיים און UNG ענזיים.דעריבער, עס קענען באַקומען אַ גוט אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ציל גענעס און פאַרמייַדן פאַלש אַמפּלאַפאַקיישאַן געפֿירט דורך פּקר ריזידזשואַל און אַעראָסאָל פאַרפּעסטיקונג.דער רייידזשאַנט איז קאַמפּאַטאַבאַל מיט רובֿ פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ פון מאַניאַפאַקטשערערז אַזאַ ווי אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס, Eppendorf, Bio-Rad און Roche.
קאָמפּאָנענט
1.25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix
2.5 × Neoscript Fast RT פּרעמיקס באַפער (דוטפּ)
סטאָרידזש טנאָים
אַלע קאַמפּאָונאַנץ זאָל זיין געהאלטן ביי -20 ℃ פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש און 4 ℃ פֿאַר אַרויף צו 3 חדשים.ביטע מישן ונ דורך נאָך טאָינג און סענטריפודזש איידער ניצן.ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ.
qRT-PCR רעאַקציע סיסטעם צוגרייטונג
| קאַמפּאָונאַנץ | 25μלסיסטעם | 50μלסיסטעם | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 5 × Neoscript Fast RT פּרעמיקס באַפער (דוטפּ) | 5μל | 10μל | 1× |
| 25 × Neoscript Fast RTase / UNG Mix | 1μל | 2μל | 1× |
| 25 × אָנפאַנגער-זאָנד מיקסa | 1μל | 2μל | 1× |
| מוסטער רנאַb | — | — | — |
| ddH2O | אַרויף צו 25μל | אַרויף צו 50 μ ל | — |
1) די לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער איז יוזשאַוואַלי 0.2μם.פֿאַר בעסער רעזולטאַטן, די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.2-1μם.אין אַלגעמיין, די זאָנד קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1-0.3μם.
2) ב. ווען ניצן אַ שנעל פּקר פּראַסידזשער, ינקריסינג די קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער און פּראָבעס קען רעזולטאַט אין בעסער אַמפּלאַפאַקיישאַן רעזולטאַטן, און זייער פאַרהעלטעניש זאָל זיין אָפּטימיזעד אַקאָרדינגלי.
3) פאַרשידענע טייפּס פון סאַמפּאַלז אַנטהאַלטן פאַרשידענע טייפּס און אינהאַלט פון ינכיבאַטער און קאָפּיע נומער פון ציל דזשין.דער מוסטער באַנד זאָל זיין קאַנסידערד דורך פאַקטיש צושטאַנד.מאַכן אַ דיילושאַן פון די מוסטער מיט נוקלעאַסע-פֿרייַ וואַסער אָדער TE Buffer, אויב נייטיק.
רעאקציע סיטנאָים
| רעגולער פּקר פּראָצעדור | שנעל פּקר פּראָצעדור | ||||||
| פּראָצעדור | טעמפּ. | צייַט | ציקל | פּראָצעדור | טעמפּ. | צייַט | ציקל |
| פאַרקערט טראַנסקריפּציע | 50℃ | 10-20 מינוט | 1 | פאַרקערט טראַנסקריפּציע | 50℃ | 5 מינס | 1 |
| פּאָלימעראַסע אַקטאַוויישאַן | 95℃ | 1-5 מינוט | 1 | פּאָלימעראַסע אַקטאַוויישאַן | 95℃ | 30 ס | 1 |
| דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 10-20 ס | 40-50 | דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 1-3 ס | 40-50 |
| אַנילינג און פאַרלענגערונג | 56-64℃ | 20-60 ס | אַנילינג און פאַרלענגערונג | 56-64℃ | 3-20 ס | ||
קוואַליטעט קאָנטראָל
1.פונקציע דיטעקשאַן: סענסיטיוויטי, ספּעסיפיסיטי און ריפּיטאַביליטי פון qPCR.
2.קיין עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע אַקטיוויטעט: קיין עקסאָגענאָוס ענדאָנוקלעאַסע און עקסאָנוקלעאַסע פאַרפּעסטיקונג.
הערות
1.אַמפּלאַפאַקיישאַן קורס פון גיך דנאַ פּאָלימעראַסע איז ניט ווייניקער ווי 1 קב / 10 ס.פאַרשידענע פּקר ינסטראַמאַנץ האָבן פאַרשידענע באַהיצונג און קאָאָלינג ספּידז, טעמפּעראַטור קאָנטראָל מאָדעס און טערמאַל קאַנדאַקטיוואַטי, און אַזוי אַפּטאַמאַזיישאַן פון דיין אָנפאַנגער / זאָנד קאַנסאַנטריישאַן און פליסנדיק אופֿן אין קאָמבינאַציע מיט דיין ספּעציפיש שנעל פּקר ינסטרומענט איז יקערדיק.
2.דער פּראָדוקט איז אַ ברייט אָנווענדלעך און איז פּאַסיק פֿאַר דיאַגנאָסיס מיט הויך סענסיטיוויטי.דריי-שריט פּקר אופֿן איז רעקאַמענדיד פֿאַר פּרימערז מיט נידעריק אַנילינג טעמפּעראַטור אָדער פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון לאַנג פראַגמאַנץ איבער 200 בפּ.
3.זינט פאַרשידענע אַמפּליקאָנס האָבן פאַרשידענע יוטאַלאַזיישאַן עפעקטיווקייַט פון דוטפּ און פאַרשידענע סענסיטיוויטי צו UNG, די רייידזשאַנץ זאָל זיין אָפּטימיזעד אויב די דיטעקשאַן סענסיטיוויטי דיקריסאַז ווען איר נוצן UNG סיסטעם.ביטע קאָנטאַקט אונדז פֿאַר טעכניש שטיצן אויב דארף.
4.צו ויסמיידן אַמפּלאַפאַקיישאַן פון טראַנספּערטיישאַן פּקר פּראָדוקטן, דעדאַקייטאַד יקספּערמענאַל געגנט און פּייפּעט זענען פארלאנגט פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אַרבעטן מיט גלאַווז און אָפט טוישן און טאָן ניט עפענען די פּקר רער נאָך אַמפּלאַפאַקיישאַן.
