רנאַסע ינכיבאַטער (גליסעראָל פריי)
מורינע רנאַסע ינכיבאַטער איז אַ רעקאָמבינאַנט מורינע רנאַסע ינכיבאַטער אויסגעדריקט און פּיוראַפייד פון ע.קאָלי.עס ביינדז צו רנאַסע א, ב אָדער C אין אַ 1: 1 פאַרהעלטעניש דורך ניט-קאָוואַלענט באַנדינג, דערמיט ינכיבאַטינג די טעטיקייט פון די דריי ענזימעס און פּראַטעקטינג רנאַ פון דערנידעריקונג.אָבער, עס איז נישט עפעקטיוו קעגן RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H אָדער RNase פֿון Aspergillus.מורינע רנאַסע ינכיבאַטער איז טעסטעד דורך RT-PCR, RT-qPCR און IVT מרנאַ, און איז געווען קאַמפּאַטאַבאַל מיט פאַרשידן געשעפט פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסאַז, דנאַ פּאָלימעראַסאַז און רנאַ פּאָלימעראַסעס.
קאַמפּערד מיט מענטשלעך רנאַסע ינכיבאַטערז, די מיורינע רנאַסע ינכיבאַטער טוט נישט אַנטהאַלטן צוויי סיסטעינז וואָס זענען העכסט שפּירעוודיק צו אַקסאַדיישאַן וואָס ז ינאַקטיוויישאַן פון די ינכיבאַטער.אַז מאכט עס סטאַביל אין נידעריק קאַנסאַנטריישאַנז פון דטט (ווייניקער ווי 1 מם).דער שטריך מאכט עס פּאַסיק פֿאַר נוצן אין ריאַקשאַנז ווו הויך קאַנסאַנטריישאַנז פון DTT איז אַדווערס צו דער אָפּרוף (למשל רעאַל-צייט RT-PCR).
Aאַפּלאַקיישאַן
דער פּראָדוקט קענען זיין וויידלי געניצט אין קיין עקספּערימענט ווו רנאַסע ינטערפיראַנס איז מעגלעך צו ויסמיידן רנאַ דערנידעריקונג, אַזאַ ווי:
1.פירסט-שנירל קדנאַ סינטעז, רט-פּקר, רט-קפּקר, אאז"ו ו;
2.פּראָטעקט רנאַ פון דערנידעריקונג אין אין-וויטראָ טראַנסקריפּציע / איבערזעצונג (למשל וויראַל רעפּלאַקיישאַן אין וויטראָ);
3.ינהיביטיאָן פון רנאַסע טעטיקייט בעשאַס רנאַ אפגעזונדערטקייט און רייניקונג.
סטאָרידזש טנאָים
קראָם בייַ -25 ~ -15 ℃;
פרירן-טאָ סייקאַלז ≤ 5 מאל;
גילטיק פֿאַר 1 יאָר.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט איז דיפיינד ווי די סומע פון רנאַסע ינכיבאַטער פארלאנגט צו ינכיבאַט די טעטיקייט פון 5 נג פון רנאַסע א מיט 50%.
מאָלעקולאַר וואָג
רנאַסע ינכיבאַטער (גליסעראָל-פֿרייַ) איז אַ 50 kDa פּראָטעין.
קוואַליטעט קאָנטראָל
עקסאָנוקלאַסע אַקטיוויטעט:
ינגקיוביישאַן פון 40 ו פון ענזיים מיט 1 μג λ-Hind III דיידזשעסטיד דנאַ פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג פון די דנאַ ווי באשלאסן דורך געל עלעקטראָפאָרעסיס.
ענדאָנוקלעאַסע אַקטיוויטעט:
ינגקיוביישאַן פון 40 ו פון ענזיים מיט 1 μg λ דנאַ פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג פון די דנאַ ווי באשלאסן דורך געל עלעקטראָפאָרעסיס.
ניקינג אַקטיוויטעט:
ינגקיוביישאַן פון 40 ו פון ענזיים מיט 1 μg pBR322 פֿאַר 16 שעה ביי 37 ℃ ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג פון די דנאַ ווי באשלאסן דורך געל עלעקטראָפאָרעסיס.
רנאַסע אַקטיוויטעט:
ינגקיוביישאַן פון 40 ו פון ענזיים מיט 1.6 μג MS2 רנאַ פֿאַר 4 שעה ביי 37 ℃ ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג פון די רנאַ ווי באשלאסן דורך געל עלעקטראָפאָרעסיס.
E.coli DNA:
40 ו פון ענזיים איז דיטעקטאַד דורך TaqMan qPCR.די ע.קאָלי דנאַ איז ≤ 0. 1פּג/40ו.
Nאָטעs
1. דו זאלסט נישט טרייסלען אָדער גערודער ווייאַלאַנטלי צו פאַרמייַדן ענזיים ינאַקטיוויישאַן.
2. רנאַסע ינכיבאַטער איז אַקטיוו ביי טעמפּעראַטורעס ריינדזשינג פון 25 ℃ צו 55 ℃ און איז ינאַקטיווייטיד בייַ ≥ 65 ℃.
3. די טעטיקייט פון רנאַסע ה, רנאַסע 1 און רנאַסע ט 1 איז נישט ינכיבאַטאַד.
4. די ף קייט פֿאַר ינכיבאַטינג רנאַסע טעטיקייט איז ברייט (אַקטיוו ביי ף 5-9), יגזיביטינג מאַקסימום טעטיקייט ביי ף 7-8.
