טעמפּעראַטור סענסיטיוו UNG
טעמפּעראַטור סענסיטיוו UNG (TS-UNG) איז אַ באקומען דורך רעקאָמבינאַנט אויסדרוק אין E. קאָלי.דער ענזיים קאַטאַלייזיז די מעלדונג פון פריי וראַסיל פון וראַסיל-מיט איין- און טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ און איז ינאַקטיוו קעגן רנאַ.קאַמפּערד מיט די קאַנווענשאַנאַל UNG ענזיים פון E. קאָלי דזשין אָריגין, TS-UNG ענזיים האט העכער טעטיקייט ביי נידעריק טעמפּעראַטורעס (20 ℃ ~ 37 ℃) און איז טעמפּעראַטור שפּירעוודיק און לייכט ינאַקטיווייטיד (50 ℃), אַוווידיד די דערנידעריקונג פון דוטפּ-מיט אַמפּלאַפאַקיישאַן. פּראָדוקטן אין צימער טעמפּעראַטור דורך די ריזידזשואַל טעטיקייט וואָס קען בלייַבן נאָך ינאַקטיוויישאַן פון די קאַנווענשאַנאַל UNG ענזיים.דעריבער, TS-UNG ענזיים איז ניט בלויז פּאַסיק פֿאַר פאַרהיטונג פון פּקר קאַנטאַמאַניישאַן אָפּרוף, אָבער אויך שוועבעלעך מיט די RT-PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָגראַם און קענען זיין געוויינט אין RT-PCR קאַנטאַמאַניישאַן פאַרהיטונג אָפּרוף.
רעקאַמענדיד אַפּפּליקאַטיאָן
קאַנטאַמאַניישאַן פּרעווענטיאָן אַמפּלאַפאַקיישאַן
סטאָרידזש צושטאַנד
-20 ° C פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש, זאָל זיין געמישט געזונט איידער נוצן, ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ.
סטאָרידזש באַפער
20 מם טריס-הקל (pH 7.5), 100 מם נאַקל, 0.1 מם עדטאַ, 1 מם דטט, סטאַביליזער, 50% גליסעראָל.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו דיגרייד 1 μג פון איין-סטראַנדיד דנאַ מיט דו באַסעס אין 1 שעה ביי 37 ° C איז 1 אַפּאַראַט פון טעטיקייט (ו).
קוואַליטעט קאָנטראָל
1.SDS-PAGE ילעקטראָופאָרעטיק ריינקייַט העכער ווי 98%
2.דערנידעריקונג טעטיקייט, פּעקל-צו-פּעקל קאָנטראָל, פעסטקייַט
3.קיין עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע טעטיקייט, קיין עקסאָגענאָוס ענדאָנוקלעאַסע אָדער עקסאָנוקלעאַסע קאַנטאַמאַניישאַן.
אינסטרוקציעס
| קאַמפּאָונאַנץ | באַנד (μL) | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 10 × PCR Buffer (dNTP פריי, Mg²+פרייַ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μם |
| dUTP (פאַרבייַטן dTTP) | - | 200-600 μם |
| 25 מם מגקל2 | 2-8 μל | 1-4 מם |
| 5 ו / μ ל טאַק | 0.25 | 1.25 יו |
| 1 ו / μ לץ-ונג | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 ו (0.1-0.5 יו) |
| 25 × אָנפאַנגער מיקסא | 2 | 1× |
| מוסטער | - | ＜1μג / אָפּרוף |
| ddH₂O | צו 50 | - |
באַמערקונג: אַ: אויב געניצט פֿאַר qPCR/qRT-PCR, די פלורעסאַנט זאָנד זאָל זיין מוסיף אין די אָפּרוף סיסטעם.וסואַללי, אַ לעצט אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן פון 0.2 μם קענען געבן גוט רעזולטאַטן;ווען דער אָפּרוף פאָרשטעלונג איז נעבעך, די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן קענען זיין אַדזשאַסטיד אין די קייט פון 0.2-1 μם.יוזשאַוואַלי, די זאָנד קאַנסאַנטריישאַן איז אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1-0.3 μM.קאַנסאַנטריישאַן גראַדיענט יקספּעראַמאַנץ קענען זיין געטאן צו געפֿינען די בעסטער קאָמבינאַציע פון אָנפאַנגער און זאָנד.
הערות
1.די אָפּטימאַל אָפּרוף טעמפּעראַטור פון TS-UNG ענזיים איז לעפיערעך נידעריק, און עס קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 20 ℃ ~ 37 ℃, די דאָוסאַדזש פון ענזיים און אָפּרוף צייט קענען זיין אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1 ~ 0.5 ו, 5 ~ 10 מין;און די ענזיים קענען זיין ינאַקטיווייטיד אין דעם פּראָצעס פון פאַרקערט טראַנסקריפּציע.
2.עס איז פּאַסיק פֿאַר פּקר און רט-פּקר צו פאַרמייַדן קאַנטאַמאַניישאַן.
3.ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ, און טאָן ניט ויסשטעלן צו גרויס טעמפּעראַטור פלאַקטשויישאַנז.
4.פאַרשידענע גענעס צו זיין אַמפּלאַפייד האָבן פאַרשידענע יוטאַלאַזיישאַן עפעקטיווקייַט פון דוטפּ און סענסיטיוויטי צו UNG ענזיים, דעריבער, אויב די נוצן פון UNG סיסטעם פירט צו אַ פאַרקלענערן אין דיטעקשאַן סענסיטיוויטי, די אָפּרוף סיסטעם זאָל זיין אַדזשאַסטיד און אָפּטימיזעד, אויב איר דאַרפֿן טעכניש שטיצן, ביטע קאָנטאַקט אונדזער געזעלשאַפט.
