דנאַ עקסטראַקטיאָן מיני קיט

סטאָרידזש טנאָים

קראָם בייַ -15 ~ -25 ℃ און אַריבערפירן אין צימער טעמפּעראַטור.

קאַמפּאָונאַנץ

Buffer GDP:דנאַ ביינדינג באַפער.

באַפער GW:וואַשינג באַפער;לייגן אַבסאָלוט עטאַנאָל דורך די אנגעוויזן באַנד אויף די פלאַש איידער נוצן.

elution buffer:עלוציע.

FastPure DNA מיני קאָלומנס-G:דנאַ אַדסאָרפּטיאָן שפאלטן.

זאַמלונג טובז 2 מל:זאַמלונג טובז פֿאַר פילטראַטע.

צוגעגרייט מאַטעריאַלס

1.5 מל סטעראַלייזד טובז, אַבסאָלוט עטאַנאָל און יסאָפּראָפּאַנאָל (ווען דנאַ פראַגמענט ≤100 בפּ, לייגן 1 באַנד

יסאָפּראָפּאַנאָל צו 1 באַנד געל), וואַסער וואַנע.

עקספּערימענט פּראָצעס

לייג 80 מל פון עטאַנאָל צו צעפירן Buffer GW ווי אנגעוויזן אויף די קוויטל איידער נוצן, קראָם אין צימער טעמפּעראַטור.

מעקאַניזאַם

1. פּקר אָפּרוף לייזונג

געל יקסטראַקשאַן סכעמע: לייג גלייַך באַנד Buffer GDP PCR אָפּרוף לייזונג אָפּזוך סכעמע:לייג 5 מאל די באַנד באַפער

2. GDP רעכענען די באַנד פון געל (100  μl איז 100 מג)

צעלאָזן געל

3. פּרעהעאַט בייַ 50 ~ 55℃

4. בינדן וואַש

לייג 300 μל Buffer GDP*

לייג 700 μ ל Buffer GW

לייג 700 μ ל Buffer GW

5. עלוט

לייג 20 - 30 μ ל פון עלוטיאָן באַפער אָדער דייאַנייזד וואַסער

הערות * PCR אָפּרוף פליסיק אָפּזוך אָן דעם שריט

געל יקסטראַקשאַן פּראָגראַם

1. נאָך דנאַ עלעקטראָפאָרעסיס פֿאַר פראַקשאַנייטינג דנאַ פראַגמאַנץ, עקסייז די איין פּאַס פון דנאַ פראַגמענט פון די אַגאַראָסע געל אונטער ווו ליכט.עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן אַבזאָרבאַנט פּאַפּיר צו אַרייַנציען קלאָר נעץ פון געל און מינאַמייז די גרייס פון די געל רעפטל דורך רימוווינג עקסטרע אַגאַראָסע ווי מעגלעך.ווייז די געל רעפטל (אָן מיקראָסענטריפוגע רער) צו רעכענען זייַן באַנד: דער באַנד פון 100 מג געלסליס איז בעערעך 100 μל, אַסומינג די געדיכטקייַט איז 1 ג / מל.

2. לייג גלייך באַפער גדפּ, ינגקיובייט בייַ 50 ~ 55 ℃ פֿאַר 7-10 מינוט (לויט די געל גרייס, סטרויערן די ינגקיוביישאַן צייט ביז די געל איז גאָר צעלאָזן).יבערקערן די רער 2 מאל בעשאַס די ינגקיוביישאַן.

Δ אַדישאַן פון 1-3 וואַליומז פון Buffer GDP וועט נישט השפּעה די דנאַ אָפּזוך עפעקטיווקייַט.אויב די דנאַ פראַגמענט צו זיין ריקאַווערד <100 בפּ, 3 וואַליומז פון באַפער גדפּ דאַרפֿן צו זיין צוגעגעבן;ווען די געל רעפטל איז צעלאָזן גאָר, לייגן 1 באַנד פון יסאָפּראָפּאַנאָל און מישן ונ דורך, און פאָרזעצן צו דער ווייַטער שריט.

3. סענטריפודזש בעקיצער צו ברענגען די מוסטער צו די דנאָ פון די רער, אַרייַנלייגן די FastPure DNA Mini Columns-G אין די זאַמלונג טובז 2 מל, קערפאַלי אַריבערפירן די לייזונג מאַקסימום פון 700 μ ל אַמאָל אַ טאָג.

צייט צו די פילטריישאַן שפאלטן, סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 רענטגענ ג) פֿאַר 30-60 סעק.

4. אַוועקוואַרפן די פילטראַטע און לייגן 300 μL פון Buffer GDP צו די זייַל, ינגקיובייט אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 1 מין, סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 X ג) פֿאַר 30-60 סעק.

5. אַוועקוואַרפן די פילטראַטע און לייגן 700 μL פון Buffer GW (טשעק אויב אַבסאָלוט עטאַנאָל איז צוגעלייגט אין שטייַגן!) צו די זייַל, סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 X ג) פֿאַר 30-60 סעק.

Δ ביטע לייגן Buffer GW אַרום די אַדסאָרפּטיאָן זייַל וואַנט, אָדער לייגן Buffer GW צוריק דעקן און מישן עס קאַפּויער פֿאַר 2-3 מאל צו העלפן גאָר ויסשטימען די זאַלץ אַדכירינג צו די רער וואַנט.

6. איבערחזרן שריט 5.

Δ פלאַשינג מיט Buffer GW צוויי מאָל קענען ענשור אַז די זאַלץ איז גאָר אַוועקגענומען און עלימינירן די פּראַל אויף סאַבסאַקוואַנט יקספּעראַמאַנץ.

7. אַוועקוואַרפן די פילטראַטע און סענטריפודזש די ליידיק זייַל ביי 12,000 רפּם (13,800 רענטגענ ג) פֿאַר 2 מינוט.

8. אַרייַנלייגן די זייַל אין אַ ריין 1.5 מל מיקראָסענטריפיודזש רער, לייגן 20 - 30 μ ל פון עלוטיאָן באַפער צו די צענטער פון די זייַל מעמבראַנע, ינגקיובייט פֿאַר 2 מינוט, און דעמאָלט סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 רענטגענ ג) פֿאַר 1 מין.אַוועקוואַרפן די זייַל, קראָם די באקומען דנאַ בייַ -20 .

Δ טראַנספערינג די סופּערנאַנטאַנט פון שריט 8 צו די זייַל צו עלוט ווידער און פּרעהעאַטינג די עלוטיאָן באַפער צו 55 (ווען דנאַ פראַגמענט> 3 קב) אפֿשר נוציק צו פאַרגרעסערן די אָפּזוך עפעקטיווקייַט.

PCR פּראָדוקטן אָפּזוך פּראָגראַם

דער פּראָטאָקאָל איז אָנווענדלעך צו רייניקן דנאַ פראַגמאַנץ פון פּקר פּראָדוקטן, ענזימאַטיק אָפּרוף סיסטעם און אנדערע דנאַ גראָב פּראָדוקטן (אַרייַנגערעכנט גענעטיק דנאַ).דעם לייזונג קענען יפישאַנטלי באַזייַטיקן פאַרשידן נוקלעאָטידעס, אָנפאַנגערס, אָנפאַנגער דימערז, זאַלץ מאַלאַקיולז, ענזימעס און אנדערע ימפּיוראַטיז.

1. בעקיצער סענטריפודזש פּקר פּראָדוקטן, ענזימאַטיק אָפּרוף לייזונג, און אנדערע דנאַ גראָב פּראָדוקטן.אָפּשאַצן זייער באַנד מיט פּייפּעט און אַריבערפירן צו אַ סטעראַלייזד 1.5 מל אָדער 2 מל רער.לייג דה2אָ ביז די באַנד אַרויף צו 100 μל;בשעת פֿאַר גענאָמיק דנאַ מיט הויך קאַנסאַנטריישאַן, דילוטינג צו 300 μל מיט DDH2O וועט העלפֿן צו פֿאַרבעסערן אָפּזוך עפעקטיווקייַט.

2. לייג 5 וואַליומז פון Buffer GDP, מישן ונ דורך דורך ינווערטינג אָדער וואָרטעקסינג.אויב דנאַ פראַגמענט פון אינטערעס> 100 בפּ, נאָך 1.5 וואַליומז (סאַמפּאַלז + באַפער גדפּ) פון עטאַנאָל דאַרפֿן צו זיין צוגעגעבן.

3. אַרייַנלייגן די זייַל צוריק אין די זאַמלונג רער, אַריבערפירן די מיקסטרו צו די זייַל, סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 × ג) פֿאַר 30 - 60 סעק.אויב דער באַנד פון די געמישט לייזונג איז> 700 μL, שטעלן די אַדסאָרפּטיאָן זייַל צוריק אין די זאַמלונג רער, אַריבערפירן די רוען לייזונג צו די אַדסאָרפּטיאָן זייַל און סענטריפודזש ביי 12,000 רפּם (13,800 × ג) פֿאַר 30-60 סעק.

4. דער ווייַטער פאָרשטעלונג רעפערס צו די שריט 5 - 8 פון 08- 1/געל יקסטראַקשאַן פּראָגראַם.