סופּערסטאַרט קפּקר פּרעמיקס פּלוס-ונג
קאַט נומ: HCB5071E
Superstart qPCR Premix Plus-UNG איז אַ ספּעשאַלייזד רייידזשאַנט דיזיינד פֿאַר רעאַל צייט פּקר קוואַליטאַטיווע און קוואַנטיטאַטיווע ריאַקשאַנז ניצן זאָנד-באזירט דיטעקשאַן, דעוועלאָפּעד ספּאַסיפיקלי פֿאַר ליאָפיליזאַטיאָן פּראַסעסאַז.עס כּולל אַ ראָמאַן הייס-אָנהייב ענזיים Hotstart Taq Plus (DG), וואָס האט זיין Taq ענזיים טעטיקייט געחתמעט אין צימער טעמפּעראַטור, יפעקטיוולי ינכיבאַטינג ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן געפֿירט דורך אָנפאַנגער ניט-ספּעציפיש אַנילינג אָדער אָנפאַנגער דימער פאָרמירונג אונטער נידעריק טעמפּעראַטור טנאָים, אַזוי ימפּרוווינג. די ספּעציפישקייט פון די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף.דער רייידזשאַנט ניצט אַן אָפּטימיזעד qPCR ספּעציפיש באַפער און UNG / dUTP אַנטי-קאַנטאַמאַניישאַן סיסטעם צו דערגרייכן גיך הייס-סטאַרטינג, און שטארק ימפּרוווינג די עפעקטיווקייַט און סענסיטיוויטי פון qPCR ריאַקשאַנז.עס קענען באַקומען גוט נאָרמאַל קורוועס אין אַ ברייט קייט פון קוואַנטיטאַטיאָן געביטן און אַקיעראַטלי דורכפירן קוואַנטיטאַטיאָן, יפעקטיוולי פּרעווענטינג פאַלש positive אַמפּלאַפאַקיישאַן געפֿירט דורך ריזידזשואַל פּקר פּראָדוקטן אָדער אַעראָסאָל קאַנטאַמאַניישאַן.דער רייידזשאַנט איז קאַמפּאַטאַבאַל מיט רובֿ פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ פון מאַניאַפאַקטשערערז אַזאַ ווי אַפּפּליעד ביאָסיסטעמס, עפּפּענדאָרף, ביאָ-ראַד און ראָוש עטק, און יגזיבאַץ גוט פעסטקייַט אין ליאָפילייזד פאָרעם.
רעאַגענט זאַץ
1. 5 × HotstartPremix Plus-UNG (Mg2+פריי) (DG)
2. 250 מם מגקל2
3. 4 × ליאָפּרוטעקטאַנט (אַפּשאַנאַל)
סטאָרידזש טנאָים
לאַנג-טערמין סטאָרידזש ביי -20 ℃;קענען זיין סטאָרד בייַ 4 ℃ פֿאַר אַרויף צו 3 חדשים.מישן געזונט איידער נוצן אוןויסמיידן ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג.
סייקלינג פּראָטאָקאָל
| פּראָצעדור | טעמפּ. | צייַט | ציקל |
| דיידזשעסטשאַן | 50℃ | 2 מין | 1 |
| פּאָלימעראַסע אַקטאַוויישאַן | 95℃ | 1~5 מין | 1 |
| דענאַטורע | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| אַנילינג און פאַרלענגערונג | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR ליקוויד רעאַקטיאָן סיסטעם צוגרייטונג
|
זאַץ |
25 μ ל באַנד |
50 μ ל באַנד |
לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 5×האָטסטאַרט פּרעמיקס פּלוס-ונג(מג2+פריי) (DG) | 5μל | 10μל | 1× |
| 250 מם מגקל2 | 0.45 μ ל | 0.9 μ ל | 4.5 מם |
| 4×ליאָפּראָטעקטאַנט1 | 6.25 μ ל | 12.5 μ ל | 1× |
| 25 × אָנפאַנגער-זאָנד מיקס2 | 1μל | 2μל | 1× |
| מוסטער דנאַ3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | צו 25 μ ל | צו 50 μ ל | —— |
1. א לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון 0.2μם פֿאַר פּרימערז יוזשאַוואַלי ייעלדס גוט רעזולטאַטן;ווען אָפּרוף פאָרשטעלונג איז נעבעך, סטרויערן די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן אין די קייט פון 0.2-1μם ווי דארף.זאָנד קאַנסאַנטריישאַן איז טיפּיקלי אָפּטימיזעד אין די קייט פון 0.1-0.3μם דורך גראַדיענט יקספּעראַמאַנץ צו געפֿינען אָפּטימאַל קאַמבאַניישאַנז.
2. די קאָפּיע נומער פון ציל גענעס קאַנטיינד אין פאַרשידענע טייפּס פון טעמפּלאַטעס וועריז;אויב נייטיק, גראַדיענט דיילושאַן קענען זיין דורכגעקאָכט צו באַשטימען די אָפּטימאַל סומע פון טעמפלען.
3. דעם סיסטעם קענען זיין ליאָפיליזעד;ווען קאַסטאַמערז נוצן דעם סיסטעם אָן ייַז קאַלט-דרייינג רעקווירעמענץ, 4 × ליאָפּראָטעקטאַנט קענען זיין סאַלעקטיוולי צוגעגעבן; אויב עס זענען פרירן-דאַר פּראָדוקטן פארלאנגט, בעשאַס פליסיק ריידזשאַנץ בינע פּראָדוקט פאָרשטעלונג וואַלאַדיישאַן, עס מוזן לייגן 4 × ליאָפּרוטעקטאַנט צו ענשור קאָנסיסטענסי מיט די ליאָפילייזד סיסטעם קאַמפּאָונאַנץ און יפעקץ.
ווען די סיסטעם איז נוצןד פֿאַר פרירן-דריינג, צוגרייטן די סיסטעם as ווייַטערדיק:
| זאַץ | 25µL רעאַקציע סיסטעם |
| 5 × HotstartPremix Plus-UNG (Mg2+פריי) (DG) | 5μל |
| 250 מם מגקל2 | 0.45 μ ל |
| 4×ליאָפּראָטעקטאַנט | 6.25 μ ל |
| 25 × אָנפאַנגער-זאָנד מיקס | 1μל |
| ddH2O | צו 18-20 μל |
* אויב אנדערע סיסטעמען פֿאַר פרירן-דריינג איז דארף, ביטע באַראַטנ זיך סעפּעראַטלי.
ליאָפיליזאַטיאָן פּראָצעסss
| פּראָצעדור | טעמפּ. | צייַט | צושטאַנד | דרוק |
| פאַר פריזינג | 4℃ | 30 מין | האלט |
1 אַטם |
| -50℃ | 60 מין | אָפּקילן | ||
| -50℃ | 180 מין | האלט | ||
| ערשטיק דרייינג | -30℃ | 60 מין | באַהיצונג |
לעצט וואַקוום |
| -30℃ | 70 מין | האלט | ||
| צווייטיק דרייינג | 25℃ | 60 מין | באַהיצונג |
לעצט וואַקוום |
| 25℃ | 300 מין | האלט |
2. די אויבן ליאָפיליזאַטיאָן פּראָצעס איז בלויז פֿאַר דערמאָנען.פאַרשידענע פּראָדוקט טייפּס און פאַרשידענע פרירן דרייערז האָבן פאַרשידענע פּאַראַמעטערס, אַזוי אַדזשאַסטמאַנץ קענען זיין געמאכט לויט די פאַקטישבאדינגונגען בעשאַס נוצן.
3. פאַרשידענע ליאָפיליזאַטיאָן פּראַסעסאַז קען זיין פּאַסיק פֿאַר פאַרשידענע באַטש סיזעס פון ליאָפיליזעדפּראָדוקטן, אַזוי גענוג טעסטינג וואַלאַדיישאַן מוזן זיין דורכגעקאָכט ווען געניצט פֿאַר גרויס-וואָג פּראָדוקציע.
ינסטראַקשאַנז פֿאַר נוצן ליאָפיליזעד פּודער
1. בעקיצער סענטריפודזש די ליאָפיליזעד פּודער;
2. לייג נוקלעיק זויער מוסטער צו די ליאָפילייזד פּודער און לייגן וואַסער אַרויף צו 25 μ ל;
3. מישן געזונט דורך סענטריפוגיישאַן און לויפן אויף מאַשין.
קוואַליטעט קאָנטראָל:
1. פאַנגקשאַנאַל טעסטינג: סענסיטיוויטי, ספּעסיפיסיטי, רעפּראָדוסיביליטי פון קפּקר.
2. קיין עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע טעטיקייט, קיין עקסאָגענאָוס ענדאָ / עקסאָנוקלעאַסע קאַנטאַמאַניישאַן.
טעכניש אינפֿאָרמאַציע:
1. סופּערסטאַרט קפּקר פּרעמיקס פּלוס-ונג ניצט אַ ראָמאַן הייס-אָנהייב ענזיים וואָס ינייבאַלז גיך הייס-סטאַרטינג ין 1 ~ 5 מינוט;דורך ספּעציעל באַפער פאָרמיוליישאַן עס איז פּאַסיק פֿאַר מולטיפּלעקס פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר ריאַקשאַנז.
2. עס האט אַ העכער ספּעסיפיסיטי וואָס ימפּרוווז די סענסיטיוויטי פון פלורעסאַנס קוואַנטיטאַטיווע פּקר שיעור דיטעקשאַן, מאכן אַמפּלאַפאַקיישאַן קורוועס נאָרמאַליזיישאַן, פלואָרעססענסע ווערט קריגן קלאָר ווי דער טאָג פֿאַרבעסערונג אין נידעריק קאַנסאַנטריישאַן טעמפּלאַטעס, פּאַסיק ווי הויך סענסיטיוויטי פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר דיטעקשאַן רייידזשאַנץ.
3. פֿאַר פּרימערז מיט נידעריקער אַנילינג טעמפּעראַטור אָדער מער ווי 200 בפּ פראַגמאַנץ, 3-שריט אופֿן איז רעקאַמענדיד.
4. די יוטאַלאַזיישאַן עפעקטיווקייַט פון דוטפּ און סענסיטיוויטי צו UNG ענזיים זענען אַנדערש פֿאַר פאַרשידענע ציל גענעס, אַזוי אויב ניצן UNG סיסטעם פירט צו אַ פאַרקלענערן אין דיטעקשאַן סענסיטיוויטי, די אָפּרוף סיסטעם זאָל זיין אַדזשאַסטיד און אָפּטימיזעד.אויב טעכניש שטיצן איז פארלאנגט ביטע קאָנטאַקט אונדזער פירמע.
5. ניצן דעדאַקייטאַד געביטן און פּיפּעטטעס איידער און נאָך אַמפּלאַפאַקיישאַן, טראָגן גלאַווז בעשאַס אָפּעראַציע און פאַרבייַטן זיי אָפט;טאָן ניט עפענען די אָפּרוף רער נאָך פּקר קאַמפּלישאַן צו מינאַמייז קאַנטאַמאַניישאַן פון סאַמפּאַלז דורך פּקר פּראָדוקטן.
