Bst 2.0 דנאַ פּאָלימעראַסע (גליסעראָל פריי)
בסט דנאַ פּאָלימעראַסע וו 2 איז דערייווד פון Bacillus stearothermophilus דנאַ פּאָלימעראַסע איך, וואָס האט 5′→3′ דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט און שטאַרק קייט פאַרבייַט טעטיקייט, אָבער קיין 5′→3′ עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט.Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז יידילי פּאַסיק פֿאַר שטראַל-דיספּלייסמאַנט, יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן לאָמפּ (לופּ מעדיאַטעד יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן) און גיך סיקוואַנסינג.
קאַמפּאָונאַנץ
| קאָמפּאָנענט | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (גליסעראָל-פֿרייַ) (8 ו / μ ל) | 0.2 מל | 1 מל | 10 מל |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 3×10 מל |
| MgSO4(100מם) | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 2×10 מל |
אַפּפּליקאַטיאָנס
1.LAMP יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן
2.דנאַ שנירל איין דיספּלייסמאַנט אָפּרוף
3.היגה גק דזשין סיקוואַנסינג
4.דנאַ סיקוואַנסינג פון נאַנאָגראַם מדרגה.
סטאָרידזש צושטאַנד
טראַנספּאָרטאַטיאָן אונטער 0 ° C און זיין סטאָרד בייַ -25 ° C ~ -15 ° C.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים וואָס ינקאָרפּערייט 25 נמאָל פון דנטפּ אין זויער ינסאַליאַבאַל מאַטעריאַל אין 30 מינוט ביי 65 ° C.
קוואַליטעט קאָנטראָל
1.פּראָטעין ריינקייַט אַססייַ (SDS-PAGE):די ריינקייַט פון Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 איז ≥ 99% באשלאסן דורך SDS-PAGE אַנאַליסיס ניצן Coomassie Blue דיטעקשאַן.
2.עקסאָנוקלעאַס אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μ ל אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1 μg λ -Hind Ⅲ דיידזשעסטיד דנאַ פֿאַר 16 שעה ביי 37 ℃ רעזולטאַטן אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
3.ניקאַסע אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μL אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1 μg pBR322 DNA פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C רעזולטאַטן אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
4.רנאַסע אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μL אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1.6 μג MS2 RNA פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C, ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
5.E. coli DNA:120 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז סקרינד פֿאַר די בייַזייַן פון E. קאָלי גענאָמיק דנאַ ניצן TaqMan qPCR מיט פּרימערז ספּעציפיש פֿאַר די E. קאָלי 16S רRNA לאָקוס.די E. קאָלי גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַניישאַן איז ≤1 קאָפּי.
לאָמפּ רעאַקציע
| קאַמפּאָונאַנץ | 25μל |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μל |
| MgSO4 (100מם) | 1.5 μל |
| dNTPs (10 מם יעדער) | 3.5 μל |
| SYTO™ 16 גרין (25×)a | 1.0 μל |
| אָנפאַנגער מישןb | 6 μל |
| Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 (גליסעראָל-פריי) (8 ו / UL) | 1 μל |
| מוסטער | × μל |
| ddH₂O | אַרויף צו 25 μ ל |
הערות:
1 ) א .SYTOTM 16 גרין (25×): לויט יקספּערמענאַל באדערפענישן, אנדערע דיעס קענען זיין געוויינט ווי סאַבסטאַטוץ;
2 ) ב.אָנפאַנגער מישן: באקומען דורך מיקסינג 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μM F3, 2.5 μM B3, 5 μM LF, 5 μM LB און אנדערע וואַליומז.
רעאַקציע און צושטאַנד
1 × HC Bst V2 Buffer, די ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור איז צווישן 60 °C און 65 °C.
היץ ינאַקטיוואַטיאָן
80 °C, 20 מינוט
