פּראָטעינס ק נגס (פּודער)
קאַט נומ: HC4507A
NGS פּראָטעאַסע ק איז אַ סטאַביל סערינע פּראָטעאַסע מיט הויך ענזיים טעטיקייט און ברייט סאַבסטרייט ספּעסיפיקאַטי. די ענזיים פּרעפערענטשאַלי דיקאַמפּאָוזיז עסטער קייטן און פּעפּטייד קייטן שכייניש צו די C-וואָקזאַל פון כיידראָופאָביק אַמינאָ אַסאַדז, שוועבל-מיט אַמינאָ אַסאַדז און עראַמאַטיק אַמינאָ אַסאַדז.אַזוי, עס איז אָפט געניצט צו דיגרייד פּראָטעינס אין קורץ פּעפּטיידז.NGS פּראָטעאַסע ק איז אַ טיפּיש סערינע פּראָטעאַסע מיט די אַספּ39— זיין69— סער224קאַטאַליטיק טריאַד וואָס איז יינציק צו סערינע פּראָטעאַסעס, און די קאַטאַליטיק צענטער איז סעראַונדאַד דורך שלעפּ קאַ.2+ביינדינג זייטלעך פֿאַר סטייבאַלאַזיישאַן, מיינטיינינג הויך ענזיים טעטיקייט אונטער אַ ברייט קייט פון באדינגונגען.
ספּעציפיקאַציע
| אויסזען | ווייַס צו אַוועק-ווייַס אַמאָרפאַס פּודער, ליאָפיליזעד |
| ספּעציפיש טעטיקייט | ≥40U/mg האַרט |
| דנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
| רנאַסע | קיינער דיטעקטאַד |
| Bioburden | ≤50CFU/ג האַרט |
| רעזאַדו פון נוקלעיק זויער | <5pg/mg האַרט |
פּראָפּערטיעס
| מקור | Tritirachium אלבאם |
| עק נומער | 3.4.21.64(רעקאָמבינאַנט פֿון Tritirachium אלבאם) |
| מאָלעקולאַר וואָג | 29kDa (SDS-PAGE) |
| יסאָעלעקטריק פונט | 7.81 פיג.1 |
| אָפּטימום ף | 7.0-12.0 (אַלע דורכפירן הויך טעטיקייט) פיג.2 |
| אָפּטימום טעמפּעראַטור | 65℃ פיג.3 |
| ף סטאַביליטי | ף 4.5-12.5 (25℃,16ה) פיג.4 |
| טערמאַל פעסטקייַט | אונטער 50℃ (pH 8.0, 30מין) פיג.5 |
| סטאָרידזש פעסטקייַט | סטאָרד בייַ 25 ℃ פֿאַר 12 חדשים פיג.6 |
| אַקטיוואַטאָרס | SDS, ורעאַ |
| ינכיבאַטערז | דייסאָפּראָפּיל פלואָראָפאָספאַטע;בענזילסולפאָניל פלאָרייד |
סטאָרידזש טנאָים
סטאָר די ליאָפיליזעד פּודער בייַ -25 ~ -15 ℃ פֿאַר אַ לאַנג צייַט אַוועק פון ליכט;נאָך דיסאַלושאַן, אַליקוואָט אין צונעמען באַנד פֿאַר קורץ-טערמין סטאָרידזש ביי 2-8 ℃ אַוועק פון ליכט אָדער לאַנג-טערמין סטאָרידזש ביי -25 ~ -15 ℃ אַוועק פון ליכט.
מאסנאמען
טראָגן פּראַטעקטיוו גלאַווז און ברילן ווען איר נוצן אָדער ווייינג, און האַלטן געזונט ווענאַלייטיד נאָך נוצן.דער פּראָדוקט קען פאַרשאַפן הויט אַלערדזשיק אָפּרוף און ערנסט אויג יריטיישאַן.אויב ינכיילד, עס קען פאַרשאַפן אַלערגיע אָדער אַזמאַ סימפּטאָמס אָדער דיספּנעאַ.מייַ גרונט רעספּעראַטאָרי יריטיישאַן.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט פון NGS פּראָטעאַסע ק איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו כיידראַליזירן קייסין אין 1 μמאָל ל-טיראָסין אונטער נאָרמאַל פעסטקייַט טנאָים.
צוגרייטונג פון רעאַגענץ
| רעאַגענט | פאַבריקאַנט | קאַטאַלאָג |
| קייסין טעכנישפון רינדער מילך | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2ה2O | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| טריטשלאָראָאַסעטיק זויער | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| סאָדיום אַסאַטייט | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| אַסעטיק זויער | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| הקל | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| סאָדיום קאַרבאַנייט | סינאָפאַרם כעמישערReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| פאָלינע-פענאָל | סאַנגאָן ביאָטעטש (שאַנגהאַי)קאָו, לטד. | A500467-0100 |
| ל-טיראָסינע | סיגמאַ | 93829 |
רעאַגענט איך:
סאַבסטרייט: 1% קאַסעין פֿון רינדערנס מילך לייזונג: צעלאָזן 1 ג קישקע מילך אין 50 מל פון 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג, ף 8.0, היץ אין וואַסער וואַנע ביי 65-70 °C פֿאַר 15 מינוט, קאָך און צעלאָזן, קיל מיט וואַסער, אַדזשאַסטיד דורך סאָדיום כיידראַקסייד צו pH 8.0 און צעפירן אין 100 מל.
רעאַגענט II:
טקאַ לייזונג: 0.1 ם טריטשלאָראָאַסעטיק זויער, 0.2 ם סאָדיום אַסאַטייט און 0.3 ם אַסעטיק זויער (וועגן 1.64 ג טריטשלאָראָאַסעטיק זויער + 1.64 ג סאָדיום אַסאַטייט + 1.724 מל אַסעטיק זויער סאַקסעסיוולי, לייגן 50 מל דעיאָניזעד וואַסער, סטרויערן מיט HCl03 און דילוטע מיט HCl03 צו 4.724 מל אַסעטיק זויער. 100 מל).
רעאַגענט III:
0.4 ם סאָדיום קאַרבאַנייט לייזונג (וועגן 4.24 ג אַנהידראָוס סאָדיום קאַרבאַנייט און צעלאָזן אין 100 מל וואַסער)
רעאַגענט IV:
פאָלין פענאָל רייידזשאַנט: צעפירן 5 מאל מיט דייאָניזעד וואַסער.
רעאַגענט V:
ענזיים דיילוענט: 0.1 ם סאָדיום פאָספאַטע לייזונג, ף 8.0.
רעאַגענט VI:
ל-טיראָסינע נאָרמאַל לייזונג: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 ומאָל / מל ל-טיראָסין צעלאָזן מיט 0.2 ם הקל.
פּראָצעדור
1. קער אויף די UV-Vis ספּעקטראָפאָטאָמעטער און סעלעקטירן פאָטאָמעטריק מעזשערמאַנט.
2. שטעלן די ווייוולענגט ווי 660נם.
3. קער אויף די וואַסער וואַנע, שטעלן די טעמפּעראַטור צו 37 ℃, ענשור די טעמפּעראַטור אַנטשיינדזשד פֿאַר 3-5 מינוט.
4. פּרעהעאַט 0.5 מל סאַבסטרייט אין אַ 2 מל סענטריפודזש רער ביי 37 ℃ וואַסער וואַנע פֿאַר 10 מינוט.
5. עקסטראַקט 0.5 מל דיילוטאַד ענזיים לייזונג אין די פּרעהעאַטעד סענטריפודזש רער פֿאַר 10 מינוט.שטעלן ענזיים דילוענט ווי ליידיק גרופּע.
6. לייג 1.0 מל טקאַ רעאַגענט מיד נאָך דער אָפּרוף.מישן געזונט און ינגקיובייט אין וואַסער וואַנע פֿאַר 30 מינוט.
7. סענטריפוגאַטע אָפּרוף לייזונג.
8. לייג די פאלגענדע קאַמפּאָונאַנץ אין דער סדר ספּעסיפיעד.
| רעאַגענט | באַנד |
| סופּערנאַטאַנט | 0.5 מל |
| 0.4 ם סאָדיום קאַרבאַנייט | 2.5 מל |
| פאָלין פענאָל רייידזשאַנט | 0.5 מל |
9. מישן געזונט איידער ינגקיובייטינג אין וואַסער וואַנע אַ 37 ℃ פֿאַר 30 מינס.
10. אָד660איז באשלאסן ווי OD1;ליידיק קאָנטראָל גרופּע: ענזיים דילוענט איז געניצט צו פאַרבייַטן ענזיים לייזונג צו באַשטימען אָד660ווי OD2, ΔOD=OD1-אָד2.
11. ל-טיראָסין נאָרמאַל ויסבייג: 0.5 מל פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן ל-טיראָסין לייזונג, 2.5 מל 0.4 ם סאָדיום קאַרבאַנייט, 0.5 מל פאָלין פענאָל רייידזשאַנט אין 5 מל סענטריפודזש רער, ינגקיובייט אין 37 ℃ פֿאַר 30 מינוט, דעטעקט פֿאַר אָד.660פֿאַר פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַן פון ל-טיראָסין, דעמאָלט באקומען די נאָרמאַל ויסבייג Y=kX+b, ווו י איז די ל-טיראָסין קאַנסאַנטריישאַן, X איז OD600.
קאַלקולאַטיאָן
2: גאַנץ באַנד פון אָפּרוף לייזונג (מל)
0.5: באַנד פון ענזיים לייזונג (מל)
0.5: רעאַקציע פליסיק באַנד געניצט אין טשראָמאָגעניק פעסטקייַט (מל)
10: אָפּרוף צייט (מין)
Df: דילוטיאָן קייפל
C: ענזיים קאַנסאַנטריישאַן (מג / מל)
פיגיערז
פייג.1 דנאַ רעזאַדו
| מוסטער | Ave C4 | נוקלעיק זויער אָפּזוך (פּג / מג) | אָפּזוך (%) | גאַנץ נוקלעיק זויער ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| רנאַ-פֿרייַ ה2אָ | ניט באשלאסן | — | — | — |
פיג.2 אָפּטימום ף
פיג.3 אָפּטימום טעמפּעראַטור
פיג.4 פּה סטאַביליטי
פיג.5 טערמאַל פעסטקייַט
פיג.6 סטאָרידזש פעסטקייַט ביי 25℃
