M-MLV פאַרקערט טראַנסקריפּציע
רעווסקריפּט פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע איז באקומען דורך גענעטיק ינזשעניעריע טעכנאָלאָגיע.עס האט העכער cDNA סינטעז פיייקייט, טערמאַל פעסטקייַט און אָפּרוף טעמפּעראַטור שיעור (אַרויף צו 60 ° C).די סינטאַסייזד cDNA פּראָדוקט איז אַרויף צו 10 קב.עס ענכאַנסיז די קירבות פון די טעמפּלאַטעס און איז פּאַסיק פֿאַר פאַרקערט טראַנסקריפּציע פון רנאַ טעמפּלאַטעס מיט קאָמפּלעקס צווייטיק סטרוקטור אָדער נידעריק קאָפּיע גענעס.
קאַמפּאָונאַנץ
| קאָמפּאָנענט | HC2003 ב-01 (10,000 יו) | HC2003 ב-02 (5*10,000 יו) | HC2003 ב-03 (200,000 יו) |
| RevScript פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע (200U/μL) | 50 μל | 5×50 μל | 1 מל |
| 5 × רעווסקריפּט באַפער | 250 μל | 1.25 מל | 5 מל |
סטאָרידזש צושטאַנד
דער פּראָדוקט זאָל זיין סטאָרד בייַ -25 ° C ~ -15 ° C פֿאַר 2 יאָר.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט ינקאָרפּערייץ 1 נמאָל פון דטטפּ אין זויער-ינסאַליאַבאַל מאַטעריאַל אין 10 מינוט ביי 37 ° C ניצן אָליגאָ (דט) ווי אָנפאַנגער.
רעאַקציע סעטאַפּ
1. דענאַטוראַטיאָן פון רנאַ מוסטער (דעם שריט איז אַפּשאַנאַל, דינאַטוראַטיאָן פון רנאַ מוסטער העלפּס צו עפֿענען די צווייטיק סטראַקטשערז, וואָס וועט פֿאַרבעסערן די טראָגן פון דער ערשטער שנירל קדנאַ.)
| קאַמפּאָונאַנץ | באנד (μל) |
| RNase free ddH2O | צו 13 |
| אָליגאָ (דט)18 (50 μמאָל/ל) אָדער ראַנדאָם אָנפאַנגער (50 μמאָל / ל) אָדער גענע ספּעציפיש פּרימערז (2 μמאָל / ל) | 1 |
| אָדער 1 | |
| אָדער 1 | |
| רנאַ מוסטער | Xa |
הערות:
1) אַ: גאַנץ רנאַ: 1-5 וג אָדער מרנאַ: 1-500 נג
2) ינגקיובייטינג בייַ 65 ° C פֿאַר 5 מינוט, דעמאָלט טראַנספערינג אויף אייז מיד צו ציטער פֿאַר 2 מינוט.קורץ סענטריפוגיישאַן צו זאַמלען אָפּרוף פליסיק, לייגן די פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף לייזונג ווי געוויזן אין די פאלגענדע טיש.דזשענטלי פּייפּעט צו מישן.
1. צוגרייטונג פון די אָפּרוף געמיש (20 μ ל באַנד)
| קאַמפּאָונאַנץ | באנד (μל) |
| געמיש פון פרייַערדיק שריט | 13 |
| 5×באַפער | 4 |
| dNTP מיקס (10 nmol/L) | 1 |
| פאַרקערט טראַנסקריפּציע (200 ו / μ ל) | 1 |
| רנאַסע ינכיבאַטער (40 ו / μ ל) | 1 |
1.דורכפירן די אָפּרוף אונטער די פאלגענדע טנאָים:
| טעמפּעראַטור (°C) | צייַט |
| 25 °Ca | 5 מינס |
| 42 °Cb | 15-30 מינוט |
| 85 °Cc | 5 מינס |
הערות:
1 ) א .ינגקיובייטינג ביי 25 ° C פֿאַר 5 מינוט איז פארלאנגט בלויז פֿאַר די ראַנדאָם העקסאַמערס.ביטע האָפּקען דעם שריט ווען ניצן Oligo (dT)18אָדער גענע ספּעציפיש אָנפאַנגער.
2 ) ב.די רעקאַמענדיד פאַרקערט טראַנסקריפּציע טעמפּעראַטור איז 42 ° C, פֿאַר טעמפּלאַטעס מיט קאָמפּליצירט צווייטיק סטראַקטשערז אָדער הויך גק אינהאַלט, עס איז רעקאַמענדיד צו כאַפּן די אָפּרוף טעמפּעראַטור צו 50-55 ° C.
3 ) ג.באַהיצונג ביי 85 ° C פֿאַר 5 מינוט צו ינאַקטיווייט פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע.
4) די פּראָדוקט קענען זיין גלייך געניצט אין פּקר אָדער קפּקר ריאַקשאַנז, אָדער סטאָרד ביי -20 ° C פֿאַר קורץ-טערמין סטאָרידזש.עס איז רעקאַמענדיד צו ייַנרייען די פּראָדוקטן און קראָם ביי -80 ° C פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש.ויסמיידן אָפט פרירן-טאָ.
5) דער פּראָדוקט איז פּאַסיק פֿאַר איין-שריט RT-qPCR, עס איז רעקאַמענדיד צו לייגן 10-20 ו פאַרקערט טראַנסקריפּציע פֿאַר יעדער 25μL אָפּרוף סיסטעם, אָדער ביסלעכווייַז פאַרגרעסערן די סומע פון פאַרקערט טראַנסקריפּציע לויט די פאַקטיש סיטואַציע.
הערות
1.ביטע האַלטן די יקספּערמענאַל געגנט ריין;ריין גלאַווז און מאַסקס זאָל זיין וואָרן בעשאַס אָפּעראַציע.כל די קאָנסומאַבלעס געניצט אין דער עקספּערימענט זאָל זיין רנאַסע פריי צו פאַרמייַדן רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן.
2.אַלל פּראָוסידזשערז זאָל זיין געטאן אויף אייז צו פאַרמייַדן רנאַ דערנידעריקונג.
3.היגה קוואַליטעט רנאַ סאַמפּאַלז זענען רעקאַמענדיד צו ענשור הויך עפעקטיווקייַט פון פאַרקערט טראַנסקריפּציע.
4.טהיס פּראָדוקט איז בלויז פֿאַר פאָרשונג נוצן.
5. ביטע אַרבעטן מיט לאַב רעק און דיספּאָוזאַבאַל גלאַווז, פֿאַר דיין זיכערקייַט.
