BspQI
BspQI קענען זיין רעקאָמבינאַנטלי אויסגעדריקט אין E. קאָלי וואָס קענען דערקענען ספּעציפיש זייטלעך און זענען געשאפן אונטער
BspQI, אַן IIs ריסטריקשאַן ענדאָנוקלעאַסע ריסטריקשאַן ענדאָנוקלעאַסע, איז דערייווד פון אַ רעקאָמבינאַנט E. קאָלי שפּאַנונג וואָס קאַריז די קלאָונד און מאַדאַפייד BspQI דזשין פֿון Bacillus sphaericus.עס קענען דערקענען ספּעציפיש זייטלעך, און דערקענונג סיקוואַנס און קלעאַוואַגע זייטלעך זענען ווי גייט:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
פּראָדוקט פֿעיִקייטן
1. הויך טעטיקייט, שנעל דיידזשעסטשאַן;
2. נידעריק שטערן טעטיקייט, ינשורינג פּינטלעך קאַטינג ווי "סקאַלפּעל";
3. אָן בסאַ און כייַע-אָריגינעל פֿרייַ;
מעטהילאַטיאָן סענסיטיוויטי
Dמיטהילאַטיאָן:ניט סענסיטיוו;
Dסענטימעטער מעטהילאַטיאָן:ניט סענסיטיוו;
קפּג מעטהילאַטיאָן:ניט סענסיטיוו;
סטאָרידזש טנאָים
דער פּראָדוקט זאָל זיין שיפּט ≤ 0 ℃;קראָם אין -25 ~ - 15 ℃ צושטאַנד.
סטאָרידזש באַפער
20 מם טריס-הקל, 0.1 מם עדטאַ, 500 מם קקל, 1.0 מם דיטהיאָטהרעיטאָל, 500 μג / מל רעקאָמבינאַנט אַלבומין, 0. 1% טריטיאָן X-100 און 50% גליסעראָל (פּה 7.0 @ 25 ° C).
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו דיידזשעסטיד 1 μג פון אינערלעכער קאָנטראָל דנאַ אין 1 שעה ביי 50 ° C אין אַ גאַנץ אָפּרוף באַנד פון 50 μ ל.
קוואַליטעט קאָנטראָל
פּראָטעין ריינקייַט אַססייַ (SDS-PAGE):די ריינקייַט פון BspQI איז געווען ≥ 95% באשלאסן דורך SDS-PAGE אַנאַליסיס.
RNase:10U פון BspQI מיט 1.6μג MS2 רנאַ פֿאַר 4 שעה ביי 50 ℃ ייעלדס קיין דערנידעריקונג ווי באשלאסן דורך אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס.
ניט-ספּעציפיש דנאַסע אַקטיוויטעט:10U פון BspQI מיט 1μg λ דנאַ ביי 50 ℃ פֿאַר 16 שעה, קאַמפּערד מיט 50 ℃ פֿאַר 1 שעה, ייעלדס קיין וידעפדיק דנאַ ווי באשלאסן דורך אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס.
לאַגיישאַן און רעקאַטינג:נאָך דיידזשעסטשאַן פון 1 μg λDNA מיט 10U BspQI, דנאַ פראַגמאַנץ קענען זיין ליגייטיד מיט T4 DNA ליגאַסע ביי 16ºC.און די ליגאַטעד פראַגמאַנץ קענען זיין ריקוט מיט BspQI.
E. קאָלי דנאַ: E. coli 16s רדנאַ-ספּעציפיש TaqMan qPCR דיטעקשאַן געוויזן אַז E.coli גענאָמע רעזאַדו ≤ 0.1pg/ul.
האָסט פּראָטעין רעזאַדו:≤ 50 פּיפּיעם
באַקטיריאַל ענדאָטאָקסין: LAL-טעסט, לויט כינעזיש פאַרמאַקאָפּאָעיאַ יוו 2020 אַדישאַן, געל לימיט פּרובירן אופֿן, אַלגעמיין הערשן (1143).ענדאָטאָקסין אינהאַלט פון באַקטיריאַ זאָל זיין ≤10 אי.יו. / מג.
אָפּרוף סיסטעם און באדינגונגען
| קאָמפּאָנענט | באַנד |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μל |
| דנאַ | 1 μג |
| 10 X BspQ איך באַפער | 5 μL |
| dd H2O | אַרויף צו 50 μ ל |
רעאַקציע טנאָים: 50 ℃, 1 ~ 16 ה.
היץ ינאַקטיוויישאַן: 80 ° C פֿאַר 20 מינוט.
די רעקאַמענדיד אָפּרוף סיסטעם און טנאָים קענען צושטעלן אַ לעפיערעך גוט ענזיים דיידזשעסטשאַן ווירקונג, וואָס איז בלויז פֿאַר דערמאָנען, ביטע אָפּשיקן צו די יקספּערמענאַל רעזולטאַטן פֿאַר דעטאַילס.
פּראָדוקט אַפּלאַקיישאַן
ריסטריקשאַן פון דיידזשעסטשאַן פון ענדאָנוקלעאַס, גיך קלאָונינג.
הערות
1. דער באַנד פון ענזיים ≤ 1/10 פון די אָפּרוף באַנד.
2. שטערן טעטיקייט קען פּאַסירן ווען גליסעראָל קאַנסאַנטריישאַן איז מער ווי 5%.
3. קלעאַוואַגע טעטיקייט קען פּאַסירן ווען סאַבסטרייט אונטער די רעקאַמענדיד פאַרהעלטעניש.
