וואַרעם אָנהייב Bst 2.0 דנאַ פּאָלימעראַסע (גליסעראָל פריי)
בסט דנאַ פּאָלימעראַסע וו 2 איז דערייווד פון Bacillus stearothermophilus דנאַ פּאָלימעראַסע איך, וואָס האט 5′→3′ דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט און שטאַרק קייט פאַרבייַט טעטיקייט, אָבער קיין 5′→3′ עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט.Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז יידילי פּאַסיק פֿאַר שטראַל-דיספּלייסמאַנט, יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן לאָמפּ (לופּ מעדיאַטעד יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן) און גיך סיקוואַנסינג.Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 איז אַ הייס-אָנהייב ווערסיע באזירט אויף Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 (HC5005A) באקומען דורך ריווערסאַבאַל מאָדיפיקאַטיאָן טעכנאָלאָגיע, וואָס קענען ינכיבאַט דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט אין צימער טעמפּעראַטור, אַזוי די אָפּרוף סיסטעם קענען זיין אַפּערייטאַד און פאָרמולירט אין צימער טעמפּעראַטור צו פאַרמייַדן ניט -ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן און פֿאַרבעסערן אָפּרוף עפעקטיווקייַט, און דעם ווערסיע קענען זיין ליאָפיליזעד.אין דערצו, זייַן טעטיקייט איז רעלעאַסעד אין הויך טעמפּעראַטורעס, אַזוי עס איז ניט נויטיק פֿאַר אַ באַזונדער אַקטאַוויישאַן שריט.
קאַמפּאָונאַנץ
| קאָמפּאָנענט | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 (גליסעראָל-פֿרייַ) (8U / μL) | 0.2 מל | 1 מל | 10 מל |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 3×10 מל |
| MgSO4(100מם) | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 2×10 מל |
אַפּפּליקאַטיאָנס
1.לאָמפּ יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן
2.דנאַ שנירל איין דיספּלייסמאַנט אָפּרוף
3.הויך גק דזשין סיקוואַנסינג
4.דנאַ סיקוואַנסינג פון נאַנאָגראַם מדרגה.
סטאָרידזש צושטאַנד
טראַנספּאָרטאַטיאָן אונטער 0 ° C און זיין סטאָרד בייַ -25 ° C ~ -15 ° C.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים וואָס ינקאָרפּערייט 25 נמאָל פון דנטפּ אין זויער ינסאַליאַבאַל מאַטעריאַל אין 30 מינוט ביי 65 ° C.
קוואַליטעט קאָנטראָל
1.פּראָטעין ריינקייַט אַססייַ (SDS-PAGE):די ריינקייַט פון Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 איז ≥ 99% באשלאסן דורך SDS-PAGE אַנאַליסיס ניצן Coomassie Blue דיטעקשאַן.
2.Eנדאָנוקלאַסעאַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μL אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1 μg λDNA פֿאַר 16 שעה ביי 37 ℃ רעזולטאַטן אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
3.עקסאָנוקלעאַס אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μ ל אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1 μg λ -Hind Ⅲ דיידזשעסטיד דנאַ פֿאַר 16 שעה ביי 37 ℃ רעזולטאַטן אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
4.ניקאַסע אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μL אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1 μg pBR322 DNA פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C רעזולטאַטן אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
5.רנאַסע אַקטיוויטעט:ינגקיוביישאַן פון אַ 50 μL אָפּרוף מיט אַ מינימום פון 8 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 מיט 1.6 μג MS2 RNA פֿאַר 16 שעה ביי 37 ° C, ריזאַלטיד אין קיין דיטעקטאַבאַל דערנידעריקונג ווי באשלאסן.
6.E. קאָלידנאַ:120 ו פון Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז סקרינד פֿאַר די בייַזייַן פון E. קאָלי גענאָמיק דנאַ ניצן TaqMan qPCR מיט פּרימערז ספּעציפיש פֿאַר די E. קאָלי 16S רRNA לאָקוס.די E. קאָלי גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַניישאַן איז ≤1 קאָפּי.
לאָמפּ רעאַקציע
| קאַמפּאָונאַנץ | 25μל |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μל |
| MgSO4 (100מם) | 1.5 μל |
| dNTPs (10 מם יעדער) | 3.5 μל |
| SYTO™ 16 גרין (25×)a | 1.0 μל |
| אָנפאַנגער מישןb | 6 μל |
| Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 (גליסעראָל-פריי) (8 ו / UL) | 1 μל |
| מוסטער | × μל |
| ddH₂O | אַרויף צו 25 μ ל |
הערות:
1 ) א .SYTOTM 16 גרין (25×): לויט יקספּערמענאַל באדערפענישן, אנדערע דיעס קענען זיין געוויינט ווי סאַבסטאַטוץ;
2 ) ב.אָנפאַנגער מישן: באקומען דורך מיקסינג 20 μ M FIP, 20 μ M BIP, 2.5 μM F3, 2.5 μM B3, 5 μM LF, 5 μM LB און אנדערע וואַליומז.
רעאַקציע און צושטאַנד
1 × HC Bst V2 Buffer, די ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור איז צווישן 60 °C און 65 °C.
היץ ינאַקטיוואַטיאָן
80 ° C, 20 מינוט
