Bst 2.0 DNA פּאָלימעראַסע (גליסעראָל פריי, הויך געדיכטקייַט)
בסט דנאַ פּאָלימעראַסע וו 2 איז דערייווד פון Bacillus stearothermophilus דנאַ פּאָלימעראַסע איך, וואָס האט 5′→3′ דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט און שטאַרק קייט פאַרבייַט טעטיקייט, אָבער קיין 5′→3′ עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט.Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז יידילי פּאַסיק פֿאַר שטראַל-דיספּלייסמאַנט, יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן לאָמפּ (לופּ מעדיאַטעד יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן) און גיך סיקוואַנסינג.דער Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 איז ביכולת צו ינכיבאַט דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט אין צימער טעמפּעראַטור, אַזוי אַז עס קענען זיין אַפּערייטאַד און די אָפּרוף סיסטעם קענען זיין פאָרמולירט אין צימער טעמפּעראַטור, פּרעווענטינג ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן און ימפּרוווינג די עפעקטיווקייַט פון דער אָפּרוף, און די ווערסיע קענען זיין ליאָפילייזד.אין דערצו, עס איז טויגעוודיק פון ריליסינג זייַן טעטיקייט אין עלעוואַטעד טעמפּעראַטורעס, אַזוי ילימאַנייטינג די נויט פֿאַר אַ באַזונדער אַקטאַוויישאַן שריט.
קאַמפּאָונאַנץ
| קאָמפּאָנענט | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNA פּאָלימעראַסע V2 (גליסעראָל-פֿרייַ) (32U/μL) | 0.05 מל | 0.25 מל | 2.5 מל |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 3×10 מל |
| MgSO4 (100מם) | 1.5 מל | 2 × 1.5 מל | 2×10 מל |
אַפּפּליקאַטיאָנס
1.לאָמפּ יסאָטהערמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן
2.דנאַ שנירל איין דיספּלייסמאַנט אָפּרוף
3.הויך גק דזשין סיקוואַנסינג
4.דנאַ סיקוואַנסינג פון נאַנאָגראַם מדרגה.
סטאָרידזש צושטאַנד
טראַנספּאָרטאַטיאָן אונטער 0 ° C און זיין סטאָרד בייַ -25 ° C ~ -15 ° C.
אַפּאַראַט דעפֿיניציע
איין אַפּאַראַט איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים וואָס ינקאָרפּערייט 25 נמאָל פון דנטפּ אין זויער ינסאַליאַבאַל מאַטעריאַל אין 30 מינוט ביי 65 ° C.
לאָמפּ רעאַקציע
| קאַמפּאָונאַנץ | 25 μלסיסטעם |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μל |
| MgSO4 (100מם) | 1.5 μל |
| dNTPs (10 מם יעדער) | 3.5 μל |
| SYTO™ 16 גרין (25×)a | 1.0 μל |
| אָנפאַנגער מישןb | 6 μל |
| Bst DNA פּאָלימעראַסע וו 2 (גליסעראָל-פריי) (32 ו / UL) | 0.25 μל |
| מוסטער | × μל |
| ddH₂O | אַרויף צו 25 μ ל |
הערות:
1 ) א .SYTOTM 16 גרין (25×): לויט יקספּערמענאַל באדערפענישן, אנדערע דיעס קענען זיין געוויינט ווי סאַבסטאַטוץ;
2 ) ב.אָנפאַנגער מישן: באקומען דורך מיקסינג 20 μM FIP, 20 μM BIP, 2.5 μM F3, 2.5 μM B3, 5 μM LF, 5 μM LB און אנדערע וואַליומז.
רעאַקציע און צושטאַנד
1 × HC Bst V2 Buffer, די ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור איז צווישן 60 °C און 65 °C.
היץ ינאַקטיוואַטיאָן
80 ° C, 20 מינוט.
